骨缺損(尤其是大型骨缺損)的治療，由局部傷情復(fù)雜和缺乏理想的修復(fù)材料，一直是困擾臨床醫(yī)生和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)工作者的一大難題，而尋找一種盡可能達(dá)到或接近自體骨移植效果的理想的骨替代材料更是無數(shù)學(xué)者熱切探索、孜孜以求的目標(biāo)。近年來日趨活躍的骨組織工程(bonetissueengineering)技術(shù)為這一課題的研究帶來了新的亮點(diǎn)和希望。目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已能從骨膜、骨髓等定向性骨祖細(xì)胞(determinedosteogenicprecursorcells,DOPC)密集處分離培養(yǎng)出成骨細(xì)胞，經(jīng)體外擴(kuò)增并與載體結(jié)合，回植體內(nèi)骨缺損處取得骨缺損修復(fù)的成功［1］。與此同時(shí)，基于對(duì)患者易接受性、可操作性和更簡(jiǎn)單易行性等方面的考慮，研究者又開始把目光投向誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞(inducibleosteogenicprecursorcells,IOPC)。其中，在體內(nèi)分布廣泛、數(shù)量巨大、部位表淺、取材方便、培養(yǎng)傳代易行、分裂增殖迅速的成纖維細(xì)胞首先成為了研究的焦點(diǎn)。由于目前許多相關(guān)研究尚處于實(shí)驗(yàn)階段，為此，本文著重就成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性及其成骨作用等作一綜述。

1成纖維細(xì)胞的來源及其生物學(xué)特性

成纖維細(xì)胞(fibroblast)是結(jié)締組織中最常見的細(xì)胞，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymalcell)分化而來。在結(jié)締組織中，成纖維細(xì)胞還以其成熟狀態(tài)—纖維細(xì)胞(fibrocyte)的形式存在，二者在一定條件下可以互相轉(zhuǎn)變。

不同類型的結(jié)締組織含成纖維細(xì)胞的數(shù)量不同。通常，疏松結(jié)締組織中成纖維細(xì)胞的數(shù)量比同樣體積的致密結(jié)締組織中所含成纖維細(xì)胞的數(shù)量要少，故分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞多以真皮等致密結(jié)締組織為取材部位［2，3］。

成纖維細(xì)胞形態(tài)多樣，常見的有梭形、大多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。成纖維細(xì)胞胞體較大，胞質(zhì)弱嗜堿性，胞核較大呈橢圓形，染色質(zhì)疏松著色淺，核仁明顯。電鏡下，其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體，表明它具有合成和分泌蛋白質(zhì)的功能。成纖維細(xì)胞尚可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)。它合成的前膠原蛋白分子經(jīng)內(nèi)切酶作用，聚合和重排，可形成與成骨細(xì)胞合成分泌的膠原原纖維一樣具有64nm(640?)周期橫紋的膠原原纖維，膠原原纖維經(jīng)互相粘合形成膠原纖維。經(jīng)檢測(cè)，這兩種細(xì)胞合成分泌的膠原纖維均是Ⅰ型膠原纖維，在形態(tài)和生化結(jié)構(gòu)上完全相同［4,5］。

處于成熟期或稱靜止?fàn)顟B(tài)的成纖維細(xì)胞，胞體變小，呈長(zhǎng)梭形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體均不發(fā)達(dá)，被稱為纖維細(xì)胞。在外傷等因素刺激下，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞，其功能活動(dòng)也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。另外，在結(jié)締組織中，仍保留著少量具有分化潛能的間充質(zhì)細(xì)胞，它們?cè)趧?chuàng)傷修復(fù)等情況下可增殖分化為成纖維細(xì)胞。

[關(guān)鍵詞]內(nèi)皮祖細(xì)胞;高血壓;再內(nèi)皮化

內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)EPCs是一種起源于骨髓的原始細(xì)胞，類似于胚胎期的成血管細(xì)胞(angioblast)。在生理或病理因素作用下，骨髓中的EPCs進(jìn)入外周血循環(huán)，并且在一定條件下可定向分化為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞。新近,有研究證實(shí)循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能與心血管危險(xiǎn)因素及動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis,AS)高度相關(guān)[1]，并且可以作為危險(xiǎn)分層的標(biāo)志。高血壓病是重要的心血管疾病的危險(xiǎn)因素，可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。作者就高血壓病與EPCs關(guān)系作一綜述。

1EPCs與血管內(nèi)皮

血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascularendothelialcell,VEC)是一層連續(xù)覆蓋整個(gè)血管腔表面的扁平細(xì)胞，內(nèi)襯于血管內(nèi)壁上，為血流提供光滑的表面，維持血液的正常流動(dòng)。VEC起屏障作用，還具有重要的內(nèi)分泌功能，參與血管損傷后的修復(fù)和免疫反應(yīng)，是體內(nèi)最大的內(nèi)分泌和旁分泌器官。血管內(nèi)皮的完整對(duì)維持血管內(nèi)皮的正常功能具有重要作用。大量研究證實(shí)，血管內(nèi)皮功能障礙與多種心血管疾病密切相關(guān)。

EPCs可以表達(dá)早期造血干細(xì)胞的標(biāo)志CD34、CD133和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2（VEGFR-2，即KDR）3種細(xì)胞表面標(biāo)志物。EPCs分化的細(xì)胞可以顯示經(jīng)典的內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和特征，例如表達(dá)血管性血友病因子和血管內(nèi)皮鈣黏蛋白、能夠攝取乙酰化低密度脂蛋白。EPCs由CD34+/KDR+細(xì)胞分化為CD34low/KDR+/CD14+細(xì)胞，直至成為具有更多成熟內(nèi)皮表型的細(xì)胞。動(dòng)物模型和人體試驗(yàn)都表明EPCs可以促進(jìn)新生血管的形成和已損傷內(nèi)皮的再內(nèi)皮化，在內(nèi)皮的維持與修復(fù)中發(fā)揮重要作用。

粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、干細(xì)胞因子（SCF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和血管生長(zhǎng)素-1（Ang-1）等細(xì)胞因子的釋放可促進(jìn)EPCs動(dòng)員入循環(huán)血。VEGF是最有效的促進(jìn)EPCs動(dòng)員的細(xì)胞因子之一。小鼠經(jīng)腹腔注射可溶性VEGF10μg，每天1次，連續(xù)1周，與對(duì)照組相比，外周血液中EPCs在治療第1天增加了254％，在治療第4天達(dá)峰值，EPC增加了375％，到治療第14天仍增加了214％[2]。在人體中，血管損傷和心肌梗死所致的組織缺血引起循環(huán)中VEGF增高，同樣與外周血EPCs數(shù)量增加有關(guān)。VEGF等動(dòng)員因子誘導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）活化促進(jìn)膜結(jié)合Kit配體向可溶性配體轉(zhuǎn)化，隨后干細(xì)胞和祖細(xì)胞移動(dòng)到骨髓微環(huán)境的血管區(qū)，進(jìn)而細(xì)胞由靜止到增殖、分化進(jìn)而釋放入外周血。

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞凋亡

1900年，Regand首次認(rèn)識(shí)到精子發(fā)生過程中存在著生殖細(xì)胞的退化。對(duì)大鼠等嚙齒目動(dòng)物的研究表明，生精過程中實(shí)際產(chǎn)生的精子數(shù)量比理論預(yù)測(cè)減少25%～75%［1］。20世紀(jì)70年代，Kerr等提出細(xì)胞凋亡（apoptosis）的概念，包括程序化細(xì)胞死亡（programmedcelldeath,PCD）和非程序化細(xì)胞死亡（nonprogrammedcelldeath,NPCD），提示細(xì)胞凋亡在男性生殖中具有重要影響［2］。現(xiàn)已證實(shí)，睪丸生殖細(xì)胞退化是通過細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。在精子發(fā)生各個(gè)階段，都存在自發(fā)性的生精細(xì)胞凋亡。但不同時(shí)期凋亡細(xì)胞數(shù)目有很大差異，原位檢測(cè)表明，在精子發(fā)生過程中主要是精原細(xì)胞和精母細(xì)胞發(fā)生凋亡，而精子細(xì)胞凋亡很少發(fā)生。精原細(xì)胞特別是A精原細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致精子數(shù)少的主要原因，其凋亡均發(fā)生在有絲分裂期間。精母細(xì)胞凋亡發(fā)生在減數(shù)分裂過程中的細(xì)線前期、偶線期，特別是粗線期。睪丸就是通過精原細(xì)胞不斷增殖，同時(shí)過量的受到損傷的生精細(xì)胞不斷凋亡，來控制精子細(xì)胞數(shù)目，維持精子發(fā)生的動(dòng)態(tài)平衡。本文就睪丸生殖細(xì)胞凋亡的生理意義、機(jī)制和影響因素作一綜述。

1生精細(xì)胞凋亡及其生理意義

生精過程是指精原細(xì)胞經(jīng)過多次有絲分裂，最后發(fā)育成精子，其中存在精細(xì)復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制。生精細(xì)胞凋亡主要發(fā)生在三個(gè)階段：首先是在A型精原細(xì)胞的有絲分裂；其次是精母細(xì)胞的減數(shù)分裂；最后是精子發(fā)生的過程［3］。生精細(xì)胞的凋亡還與生精上皮處于生精周期階段有關(guān)，不同發(fā)育階段的生精細(xì)胞對(duì)相同刺激因素反應(yīng)性不同，由此推測(cè)生精細(xì)胞凋亡有多種調(diào)節(jié)機(jī)制。現(xiàn)研究較多的是在激素和睪丸局部加熱誘導(dǎo)下，生精細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制，著也是目前較有希望的男性節(jié)育調(diào)節(jié)手段［4］。生精細(xì)胞凋亡具有重要生理意義，參與維持精子發(fā)生過程的動(dòng)態(tài)平衡，維持支持細(xì)胞與生精細(xì)胞的最佳比例，清除基因異常生殖細(xì)胞，調(diào)節(jié)生精過程中精子數(shù)量和質(zhì)量，是機(jī)體保持生殖遺傳穩(wěn)定的重要防御機(jī)制。在病理狀態(tài)下，細(xì)胞凋亡則導(dǎo)致少精或無精子癥發(fā)生［5，6］。

2生精細(xì)胞凋亡機(jī)制

2.1Bcl-2蛋白家族它包括促凋亡的蛋白（Bax、BAD、Bak、Bik、Bok、Diov、Hrk、BID和抑制凋亡的蛋白（Bcl-2、Bcl-xlr、Mcl-1、Bcl-w、Bfl-1/A1）。他們分別控制著細(xì)胞死亡通路的各個(gè)階段。Furuchi和Rodriguez發(fā)現(xiàn)［7，8］，過分表達(dá)Bcl-2的轉(zhuǎn)基因大鼠，會(huì)出現(xiàn)精原細(xì)胞增生，并且生精細(xì)胞凋亡的機(jī)會(huì)也減少。Bax缺失的大鼠會(huì)導(dǎo)致減數(shù)分裂前期生精細(xì)胞不正常積累，從而造成生精過程紊亂，以致沒有生育能力。另外一些Bcl-w缺失的大鼠也沒有生育能力［9］。這些資料都證實(shí)了Bcl-2蛋白家族的選擇性表達(dá)對(duì)生精過程異常重要。

干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制能力和一定分化潛能的細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種具有不同功能的細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段及其功能學(xué)特性，可將其進(jìn)一步分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。因此，干細(xì)胞在組織工程、再生醫(yī)學(xué)中有著重要的應(yīng)用價(jià)值。目前，牙齒缺損等牙源性疾病在中老年人中發(fā)病率較高。牙髓干細(xì)胞(dentalpulpstemcell，DPSC)是牙髓組織中的一類成體干細(xì)胞，具有一定的分化潛能和增殖能力，在牙齒再生、牙髓修復(fù)方面有著重要的應(yīng)用價(jià)值，特別是隨著相關(guān)組織工程技術(shù)的發(fā)展，DPSC具備了成為一種新型種子細(xì)胞的潛能〔1〕。

1DPSC的定義和基本生物學(xué)性質(zhì)

成牙本質(zhì)細(xì)胞是一種終末細(xì)胞，不具備進(jìn)一步分化的能力，因此，一般認(rèn)為成牙本質(zhì)細(xì)胞在遭受損傷后，牙髓內(nèi)的某些具有分化功能的前體細(xì)胞可進(jìn)一步分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞，并分泌相關(guān)細(xì)胞基質(zhì)，修復(fù)受損組織，這種前體細(xì)胞即為DPSC。DPSC具有較強(qiáng)的增殖能力和較高的分化潛能，正是這兩種生物學(xué)性質(zhì)，決定了DPSC在牙源組織修復(fù)和骨性修復(fù)方面具有重要的作用〔2〕。Gronthos等〔3〕在2000年首次正式提出了DPSC的概念，把牙髓內(nèi)可以快速增殖并且具有一定克隆形成能力的牙髓細(xì)胞命名為DPSC，研究人員應(yīng)用酶消化法對(duì)成人第三磨牙的牙髓細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行比較，結(jié)果顯示:這兩種細(xì)胞具有極為相似的免疫學(xué)特性，并且，該研究進(jìn)一步證實(shí)DP-SC經(jīng)體外誘導(dǎo)后，可形成高密度的鈣化小結(jié)，將DPSC與羥基磷灰石/磷酸三鈣(HA/TCP)支架復(fù)合后移植到小鼠背側(cè)皮下，經(jīng)過一段時(shí)間后，能觀察到類似于牙本質(zhì)-牙髓復(fù)合體樣的結(jié)構(gòu)。

2DPSC的多向分化潛能

作為一種成體干細(xì)胞，DPSC具備多向分化的潛能，這種潛能不僅僅局限在骨性分化方面，研究人員在成脂分化、神經(jīng)分化等方面均取得了一定的研究成果，在再生醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域有著重要的指導(dǎo)意義。

2.1DPSC的骨性分化DPSC的骨性分化是關(guān)于DPSC定向分化研究較早的一項(xiàng)內(nèi)容，近些年來，又有了進(jìn)一步的發(fā)展。Mori等〔4〕采用成骨分化培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)DPSC的骨性誘導(dǎo)分化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，某些典型成骨細(xì)胞基因，如:堿性磷酸酶、I型膠原、骨橋蛋白等均大量表達(dá);應(yīng)用微陣列及RT-PCR技術(shù)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在成骨分化過程中，胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5基因(IGFBP-5)、JunB原癌基因(JUNB)和核受體相關(guān)基因(NURR1)均發(fā)生表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象，這一機(jī)制在成骨分化過程中有著重要的意義。D''''Alimonte等〔5〕在人源DPSC正常成骨誘導(dǎo)過程中，加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，結(jié)果顯示:這種方法可以刺激DPSC的增殖分裂的速度加快，而且促進(jìn)了成骨分化的進(jìn)程。

【摘要目的摘要:探索細(xì)胞間黏附分子1(ICAM1)在肝卵圓細(xì)胞(HOCs)中的表達(dá),及核因子(NFκB)對(duì)其表達(dá)的調(diào)控功能.方法摘要:0.6g/kg3′甲基4二甲基胺偶氮苯（3′methyldimethylaminoazobenzene,DAB）飼喂Wistar大鼠4wk,制作肝損傷模型.利用Percoll密度梯度離心法分離HOCs,免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)HOCs對(duì)ICAM1的表達(dá)；體外培養(yǎng)HOCs并分別用NFκB激動(dòng)劑TNFα和NFκB抑制劑TGFβ1干預(yù),RTPCR對(duì)ICAM1mRNA進(jìn)行半定量分析,比較在TNFα和TGFβ1的調(diào)控下ICAM1mRNA表達(dá)的變化.結(jié)果摘要:HOCsICAM1免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)明顯陽性.和對(duì)照組比較,體外培養(yǎng)HOCs時(shí)TNFα促進(jìn)HOCs的增殖(P%26lt;0.01),TGFβ1對(duì)HOCs的增殖能力無明顯影響；RTPCR半定量分析,和對(duì)照組比較，TNFα組ICAM1mRNA相對(duì)灰度值增高(P%26lt;0.01),而TGFβ1組ICAM1mRNA相對(duì)灰度值降低(P%26lt;0.01).結(jié)論摘要:在肝損傷組織中HOCs表達(dá)ICAM1,TNFα和TGFβ1分別通過對(duì)NFκB活性的促進(jìn)和抑制來調(diào)控ICAM1的表達(dá).

【細(xì)胞間黏附分子1;肝卵圓細(xì)胞；核因子κB

0引言

近年來,肝卵圓細(xì)胞（hepaticstemcells,HOCs）的探究受到重視［1］.在大鼠肝損傷和肝癌模型的肝組織中存在HOCs大量增生［2］,但哪種細(xì)胞表達(dá)ICAM1還不完全清楚.骨髓造血干細(xì)胞（hemopoieticstemcells,HSCs）表面存在一組以ICAM1為主的黏附分子,能介導(dǎo)HSCs和骨髓基質(zhì)的黏附,從而使HSCs產(chǎn)生一種定向遷移的功能［3］.探究表明,HOCs可以來自于HSCs.既然HOCs可以來自于HSCs,且HSCs表達(dá)ICAM1,那么HOCs也應(yīng)象HSCs一樣能表達(dá)ICAM1.為此,我們探究HOCs表達(dá)ICAM1的證據(jù)及其調(diào)控.

1材料和方法

1.1材料

【摘要】探尋體外誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞的最佳細(xì)胞因子，尋求體內(nèi)修復(fù)家兔軟骨缺損的最為有效方案。［方法］rhFGF1、rhTGF-β1、rhIGF-I單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)培養(yǎng)，應(yīng)用常規(guī)染色、MTT、免疫組織化學(xué)染色的方法篩選誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞的最佳細(xì)胞因子，并將其與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合于纖維蛋白凝膠制成凝膠復(fù)合物，直接種植到兔膝關(guān)節(jié)實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)軟骨缺損處，并與對(duì)照組相比較，觀察軟骨修復(fù)效果。［結(jié)果］常規(guī)形態(tài)學(xué)觀察，rhTGF-β1和rhIGF-I聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)的細(xì)胞在形態(tài)上類似于軟骨細(xì)胞，免疫組化染色提示誘導(dǎo)細(xì)胞具有軟骨細(xì)胞表型。凝膠復(fù)合物直接種植在體內(nèi)能誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化，修復(fù)缺損的軟骨，缺少細(xì)胞因子的對(duì)照組軟骨缺損修復(fù)效果差。［結(jié)論］rhTGF-β1和rhIGF-I聯(lián)合應(yīng)用可作為誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的最佳組合，骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凝膠復(fù)合物能修復(fù)軟骨缺損。

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞因子骨髓基質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞軟骨缺損

Abstract：［Objective］Toretrievalabestcellfactorwhichcaninducebonemarrowstromalcells(bMSCs)intochondrocyteinvitroandtoexploreaneffectiveplantorepairrabbit''''schondrocytedefect.［Method］IsolatedbMSCswereculturedinvitro.rhFibroblastGrowthFactor1(rhFGF-1)、rhTransformingGrowthFactor-β1(rhTGF-β1)、rhInsulinlikeGrowthFactor-Ⅰ(rhTGF-Ⅰ)wereutilizated.TheproliferationofcellswasdetectedbyMTTassay,andthemacroscopichistology,HEstainingandimmunohistochemicalexaminationswereperformedtoseekthebestcellfactor.Invivo,toinvestigatetherepairofthearticularcartilage,bMSCscombinedwithfibringlueandrhTGF-β1、rhIGF-Iwascomparedwithcontrolgroup.［Result］ThecellsinducedbyrhTGF-β1andrhIGF-Iweresimilartochondrocytesinmorphology,andimmunohistochemicalexaminationsshowedthecellspossessedphenotypeofchondrocytes.RhTGF-β1andrhIGF-Icoulddifferentiatebonemarrowstromalcellsintocartilagecellsinvivo,andrepairthearticularcartilagedefect.Thecontrolgroupcouldnotrepairthearticularcartilagedefectefficiently.［Conclusion］rhTGF-β1andrhIGF-IarebestgroupwhichstimulatebMSCstodifferenateintocartilagecells.BMSCscombinedwithfibringlueandrhTGF-β1、rhIGF-Icanrepairthearticularcartilagedefect.

Keywords：cellfactor;bonemarrowstromalcells;chondrocyte;cartilagedefect

作者簡(jiǎn)介：童培建(1961-)，男，杭州人，教授，主任醫(yī)師，在讀博士研究生，研究方向：關(guān)節(jié)外科，(電話)0571-87070956骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）中含有少量的多功能基質(zhì)干細(xì)胞，能向成骨系細(xì)胞、成軟骨系細(xì)胞分化［1］，為骨、軟骨組織的損傷提供了潛在的修復(fù)可能。臨床軟骨缺損自行修復(fù)的效果較差，可能跟軟骨損傷局部BMSCs的含量少有關(guān)。因此作者通過對(duì)BMSCs在體外擴(kuò)增培養(yǎng)、應(yīng)用不同的細(xì)胞因子進(jìn)行誘導(dǎo)，從中尋找體外促進(jìn)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖分化的最佳條件，并將細(xì)胞因子與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合于纖維蛋白凝膠制成凝膠復(fù)合物，植入缺損處，探討體內(nèi)修復(fù)家兔軟骨缺損的效果。

1材料與方法

摘要：肝星狀細(xì)胞活化增殖細(xì)胞外基質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶細(xì)胞因子細(xì)胞收縮

80年代初，Knook等[1用膠原酶、鏈酶蛋白酶原位循環(huán)灌注法首先成功地分離了大鼠肝星狀細(xì)胞（舊稱貯脂細(xì)胞），從此人們開始了肝星狀細(xì)胞的體外探究。隨著細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用，人們對(duì)肝星狀細(xì)胞的探究和熟悉不斷深入。目前認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞是肝纖維化細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源細(xì)胞，肝星狀細(xì)胞活化是肝纖維化形成的關(guān)鍵[2,3，而肝星狀細(xì)胞活化是一個(gè)形態(tài)、功能等改變的復(fù)雜過程。本文將近年來有關(guān)肝星狀細(xì)胞活化的重要功能改變的探究進(jìn)行綜述。

1肝星狀細(xì)胞活化

迄今，肝星狀細(xì)胞活化尚無一個(gè)確切的定義。但它的主要特征是維生素A脂滴減少甚至消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增加，細(xì)胞增大，向肌成纖維樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，表達(dá)平滑肌α-肌動(dòng)蛋白，增殖明顯，合成大量細(xì)胞外基質(zhì)等[4。肝纖維化時(shí)，四氯化碳（CC14）誘導(dǎo)肝損傷3周后[5及從正常人或其他動(dòng)物分離的原代培養(yǎng)7天后的肝星狀細(xì)胞或傳代的肝星狀細(xì)胞基本具有上述特征，這些細(xì)胞被認(rèn)為是活化的肝星狀細(xì)胞。一般認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞活化可分為兩個(gè)步驟摘要：（1）啟動(dòng)摘要：對(duì)促增生和纖維化的細(xì)胞因子反應(yīng)增強(qiáng)。（2）后續(xù)活化摘要：對(duì)細(xì)胞外微環(huán)境變化反應(yīng)加劇。由于炎癥反應(yīng)在肝星狀細(xì)胞活化中起重要功能，因此，近年來有人將肝星狀細(xì)胞活化分為炎癥前期、炎癥期、炎癥后期[3。很多因素參和肝星狀細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)，其中細(xì)胞因子起主要功能。

2肝星狀細(xì)胞活化的功能改變

2.1細(xì)胞增殖

【論文關(guān)鍵詞】肺??；細(xì)胞凋亡；凋亡機(jī)制；檢測(cè)

【論文摘要】細(xì)胞凋亡是通過正常的方式在多細(xì)胞生物中消除不需要的、衰老的和受損的細(xì)胞，使機(jī)體細(xì)胞有絲分裂的速度與凋亡的速度相平衡。認(rèn)識(shí)肝病發(fā)生、發(fā)展中細(xì)胞的異常凋亡有重要作用。

細(xì)胞凋亡是一個(gè)主動(dòng)過程，是機(jī)體在生理或病理?xiàng)l件下受到刺激后，導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生一系列形態(tài)和生化方面的改變而引起的程序性細(xì)胞死亡（programmedcelldeath，PCD）。

一、細(xì)胞凋亡機(jī)制與檢測(cè)方法

1.凋亡機(jī)制

細(xì)胞凋亡的生化特點(diǎn)包括質(zhì)膜磷脂排列方向改變、細(xì)胞內(nèi)離子環(huán)境自穩(wěn)改變、蛋白酶和核酸內(nèi)切酶激活分別致細(xì)胞蛋白質(zhì)裂解和DNA斷裂、細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生神經(jīng)酰胺、線粒體功能障礙、谷胱甘肽耗竭以及轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶激活。參與引發(fā)細(xì)胞凋亡的蛋白酶有多種，包括半胱氨酰天門冬氨酸特異蛋白酶家族成員和組織蛋白酶等。特別是caspase家族成員與細(xì)胞凋亡關(guān)系最為密切，至少有14種哺乳動(dòng)物caspase已獲克隆，但僅對(duì)caspase-3和caspase-8的功能有所了解。caspase-8在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮啟動(dòng)作用；caspase-3在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮效應(yīng)作用。由于各caspase可相互激活，所以caspase蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡結(jié)構(gòu)改變的主要環(huán)節(jié)。線粒體功能障礙在細(xì)胞凋亡發(fā)生機(jī)制中起關(guān)鍵作用，能促進(jìn)線粒體功能障礙的因素很多，包括各種有害刺激和信號(hào)傳遞過程，其中某些配體/受體相互作用最為重要。配體與靶細(xì)胞表面受體相結(jié)合，就導(dǎo)致復(fù)雜的多蛋白復(fù)合物形成，即將凋亡信號(hào)傳遞給效應(yīng)蛋白酶FLICE，F(xiàn)LICE與caspase-8相互反應(yīng)可激活caspase-8，caspase-8激活后就通過某些不明的機(jī)制引發(fā)線粒體功能障礙。線粒體功能障礙導(dǎo)致細(xì)胞色素C釋放，細(xì)胞色素C與凋亡激活因子-2相結(jié)合，使caspase-3激活。caspase-3又激活DNA斷裂因子，導(dǎo)致靜息狀態(tài)的核酸內(nèi)切酶激活，最終引起DNA斷裂。從線粒體功能障礙到DNA斷裂，是細(xì)胞凋亡生化途徑的共同途徑。在肝細(xì)胞凋亡發(fā)生機(jī)制中，以Fas配體/Fas受體引發(fā)凋亡信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)研究得最多。此外，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1及其受體、腫瘤壞死因子及其受體在肝細(xì)胞凋亡發(fā)生機(jī)制中均起重要作用。細(xì)胞凋亡的主要調(diào)節(jié)因子是B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2蛋白家族的成員。Bcl-2，通過抑制凋亡以延長(zhǎng)細(xì)胞存活時(shí)間，是哺乳類動(dòng)物細(xì)胞凋亡的一種強(qiáng)大抑制因子。與Bcl-2關(guān)系密切的同源物是Bcl-x，有兩個(gè)RNA拼接變種，長(zhǎng)Bcl-X是較大的拼接變種，短Bcl-X是短拼接變種。

【論文關(guān)鍵詞】細(xì)胞凋亡；信號(hào)傳導(dǎo)

【論文摘要】凋亡是細(xì)胞的主動(dòng)死亡過程，此過程涉及一系列基因的激活表達(dá)和調(diào)控。在細(xì)胞的正常發(fā)育過程中，約有半數(shù)細(xì)胞通過凋亡途徑被清除。由于細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育、新舊細(xì)胞更替、免疫反應(yīng)終止、腫瘤發(fā)生和自發(fā)抑制，以及許多免疫性、神經(jīng)退行性疾病和衰老等方面均發(fā)揮重要作用，闡明細(xì)胞凋亡的發(fā)生及其調(diào)控機(jī)制將對(duì)相關(guān)疾病的治療展示光明的前景。本文就細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究及其最新進(jìn)展作一綜述。

細(xì)胞凋亡主要通過受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡因子或刺激因素通過第二信使系統(tǒng)傳遞信號(hào)，信號(hào)傳遞途徑?jīng)Q定了細(xì)胞的命運(yùn)。本文嘗試從細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑角度來對(duì)其機(jī)制做一概述。

1死亡受體信號(hào)通路

死亡受體配體主要通過以半胱氨酸蛋白酶下幾個(gè)方面啟動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)：受體齊聚、特殊銜接蛋白募集和caspase級(jí)聯(lián)活化。

以Fas/FasL為例：Fas是一種跨膜蛋白，屬腫瘤壞死因子受體超家族成員，它與FasL結(jié)合可以啟動(dòng)凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)引起細(xì)胞凋亡。其活化包括以下步驟：首先配體誘導(dǎo)受體三聚體化，然后在細(xì)胞膜上形成凋亡誘導(dǎo)復(fù)合物，這個(gè)復(fù)合物中包括帶有死亡結(jié)構(gòu)域的Fas相關(guān)蛋白FADD[2]。Fas又稱CD95，是由325個(gè)氨基酸組成的受體分子，F(xiàn)as一旦和配體FasL結(jié)合，可通過Fas分子啟動(dòng)致死性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終引起細(xì)胞一系列特征性變化，使細(xì)胞死亡。Fas作為一種普遍表達(dá)的受體分子，可出現(xiàn)于多種細(xì)胞表面，但FasL的表達(dá)卻有其特點(diǎn)，通常只出現(xiàn)于活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞，因而已被活化的殺傷性免疫細(xì)胞往往能夠最有效地以凋亡途徑置靶細(xì)胞于死地。Fas分子胞內(nèi)段帶有特殊的死亡結(jié)構(gòu)域。三聚化的Fas和FasL結(jié)合后，使三個(gè)Fas分子的死亡結(jié)構(gòu)域相聚成簇，吸引了胞漿中另一種帶有相同死亡結(jié)構(gòu)域的蛋白FADD[3]。FADD是死亡信號(hào)轉(zhuǎn)錄中的一個(gè)連接蛋白，它由兩部分組成：C端（DD結(jié)構(gòu)域）和N端（DED）部分。DD結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)和Fas分子胞內(nèi)段上的DD結(jié)構(gòu)域結(jié)合，該蛋白再以DED連接另一個(gè)帶有DED的后續(xù)成分，由此引起N段DED隨即與無活性的半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）酶原發(fā)生同嗜性交聯(lián)，聚合多個(gè)caspase-8的分子，caspase-8分子遂由單鏈酶原轉(zhuǎn)成有活性的雙鏈蛋白，進(jìn)而引起隨后的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，活化caspase-8通過兩個(gè)平行級(jí)聯(lián)刺激細(xì)胞凋亡：直接切割和活化caspase-3；切割Bid（Bcl-2家族蛋白），截型Bid（tBid）移位至線粒體，誘導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放，從而活化caspase-9和caspase-3，作為酶原而被激活，引起下面的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，細(xì)胞發(fā)生凋亡[4]。TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑與此類似[5]。TNF和DR-3L能夠傳導(dǎo)促凋亡和抗凋亡信號(hào)。TNFR和DR3通過接頭蛋白TRADD和活化caspase-8加速細(xì)胞凋亡。另一方面，活化NF-κB和誘導(dǎo)存活基因（IAP）的一種接頭蛋白復(fù)合物（包括RIP）可抑制細(xì)胞凋亡。通過Apo2L誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡需要caspase活性，但是否需要接頭蛋白參與尚不清楚。

【論文關(guān)鍵詞】紫杉醇；卡鉑；非小細(xì)胞肺癌；聯(lián)合化療

【論文摘要】目的觀察及評(píng)價(jià)紫杉醇聯(lián)合卡鉑化療方案對(duì)非小細(xì)胞肺癌的療效和不良反應(yīng)。方法36例初治晚期非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)用紫杉醇150mg/m2、卡鉑300mg/m2靜脈滴注，聯(lián)合化療每21d為1個(gè)療程，共2~3個(gè)療程。結(jié)果36例初治者有效率52．7%，CR5例，PR14例，NC7例,PD9例，中位生存期9個(gè)月，1年生存率為41．6%,主要不良反應(yīng)為骨髓抑制,脫發(fā),惡心,嘔吐,及關(guān)節(jié)、肌肉痛。結(jié)論紫杉醇聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌是療效較佳的方案。

近年來我國(guó)肺癌發(fā)病率逐年增加，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占80%。Ⅲ~Ⅳ期患者以聯(lián)合化療為主要治療方法。紫杉醇聯(lián)合卡鉑治療晚期肺癌方案正在臨床使用。我們應(yīng)用紫杉醇聯(lián)合卡鉑治療晚期NSCLC36例，療效顯著，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料和方法

1．1病例選擇36例患者均經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌,其中磷癌19例,腺癌14例,腺磷癌3例,男27例,女10例,年齡46~72歲，平均61歲。臨床分期:Ⅲa期17例,Ⅲb期13例,Ⅳ期6例,KPS評(píng)分≥60分,均為初治患者。

1．2治療方法紫杉醇150mg/m2靜滴第1天，卡鉑300mg/m2靜脈滴注第1天，21d為一個(gè)周期，連續(xù)用2~3個(gè)療程評(píng)價(jià)療效。在用紫杉醇前12h、6h各口服地塞米松10mg。輸液前30min肌注苯海拉明30mg，靜脈注射西米替丁300mg，預(yù)防過敏反應(yīng)。輸液過程中注意心率、呼吸、血壓及過敏反應(yīng)?；熐鞍胄r(shí)給予靜脈滴注格拉司瓊6mg止吐。