導(dǎo)語：化學(xué)藥品注射劑密封性驗證研究一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

摘要:結(jié)合藥品生產(chǎn)企業(yè)化學(xué)藥品注射劑密封性驗證實例，通過模擬樣品制備、微生物侵入試驗的總體效果進行分析和總結(jié)，筆者認(rèn)為該密封性驗證基本上能夠確保該生產(chǎn)線上焊蓋工序各項參數(shù)能夠有效保障產(chǎn)品的焊接密封性能，但應(yīng)更加重視按照新的注射劑仿制藥一致性評價技術(shù)要求進行密封性驗證研究，包括確定性的檢測方法選擇、最大允許泄露孔徑的合理性的選擇、檢測方法靈敏度測試、藥品全生命周期內(nèi)的密封性考察等。

關(guān)鍵詞:藥品;注射劑;密封性;泄露;靈敏度

注射劑在注射給藥后直接進入人體組織、甚至直接進入血液循環(huán)系統(tǒng)，所以對于注射劑的安全性要求更加嚴(yán)格，并且注射劑在開啟使用之前必須保證其無菌特性，以確保在注射劑的藥品生產(chǎn)、運輸、儲存和臨床配制應(yīng)用，包括產(chǎn)品有效期內(nèi)的全生命周期，以確保病人用藥安全［1］，要做到這一點，必須有容器完整性的驗證和監(jiān)測，才能確保不會受到微生物的污染。本文就某一企業(yè)化學(xué)藥品注射劑密封性驗證實例進行探討分析，并結(jié)合作者自己的幾點思考，與業(yè)內(nèi)各位專家同仁、以及企業(yè)各位同行老師進行分享?，F(xiàn)將企業(yè)對于其化學(xué)藥品注射劑密封性驗證的具體情況報道如下。

1基本情況簡介

本次驗證前該車間的工藝用水系統(tǒng)、HVAC系統(tǒng)和壓縮空氣系統(tǒng)均通過相關(guān)驗證并處在受控狀態(tài);包括制袋灌裝機、水浴滅菌柜在內(nèi)的所有生產(chǎn)設(shè)備均已完成相關(guān)驗證;本驗證前有關(guān)計量儀器、儀表均經(jīng)校驗合格;所需的原輔料已檢驗合格，所需生產(chǎn)設(shè)備、工器具均已清潔，所有的操作人員均已進行各項培訓(xùn)，滿足GMP標(biāo)準(zhǔn)。本次容器密封系統(tǒng)的完整性試驗采用三層共擠輸液用袋包裝材料，利用生產(chǎn)線上的制袋灌裝機制備三層共擠輸液袋，同步灌裝相應(yīng)裝量的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液，焊接組合蓋封口、經(jīng)水浴滅菌柜高溫高壓滅菌后，最后進行微生物侵入試驗，試驗分為4組，A1和A2組為正常的微生物侵入試驗組，B1和B2組為微生物挑戰(zhàn)試驗組，以驗證包裝材料的無菌可靠性是否能夠滿足無菌保障要求，并對所有的試驗數(shù)據(jù)進行匯總分析，以此驗證該車間制袋、焊蓋工序?qū)ψ⑸鋭┟芊庑缘谋Ｕ夏芰?，確保產(chǎn)品無菌性能。

2培養(yǎng)基靈敏度試驗

為確定胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)能夠支持較寬的微生物菌譜范圍，能促進革蘭氏陽性、革蘭氏陰性，酵母菌和霉菌的生長，對培養(yǎng)基進行靈敏度試驗。

2．1培養(yǎng)基的配制

準(zhǔn)確稱量胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)適量(參照計算比例為3．0g)，用適量注射用水溶解并定容至擬定的體積(參照計算比例為加注射用水至100mL)，搖勻配制成3%的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液備用。121℃，15分鐘進行滅菌，PH值控制在(7．3±0．2)分裝至11支25mL的試管中，每支10mL，加塞將試管口密封。

2．2培養(yǎng)基微生物生長試驗

將培養(yǎng)基分為二組并將每組試管編號(第一組6支，第二組4支，空白對照1支，每支數(shù)量10mL，且不得超過試管高度的2/5)，第一組接種100CFU/支的細菌類;第二組接種100CFU/支的霉菌類;金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等細菌和黑曲霉菌，每個菌種兩支，加塞蓋好后在23～28℃培養(yǎng)72小時;空白對照1支。

2．3靈敏度試驗結(jié)果

培養(yǎng)基微生物生長試驗培養(yǎng)記錄見圖1。圖1培養(yǎng)基微生物生長試驗培養(yǎng)記錄截圖根據(jù)以上結(jié)果，接種試管中每組全部出現(xiàn)微生物生長現(xiàn)象，空白對照管無菌生長，判定該培養(yǎng)基營養(yǎng)試驗合格，滿足培養(yǎng)基靈敏度要求。

3試驗樣品制備

準(zhǔn)備驗證需要用到的物料及器具，具體為培養(yǎng)基:胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基干粉1250g;250mL三層共擠膜輸液用袋:400個左右;塑料輸液容器用聚丙烯接口:400個左右;塑料輸液容器用聚丙烯組合蓋:800個左右，備用。稱取胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基1250g配制成3%溶液41666mL，除菌過濾至潔凈容器中，在車間正常的生產(chǎn)環(huán)境下，模擬車間正常生產(chǎn)的各項工藝參數(shù)，將胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基罐裝入已制好的三層共擠輸液用袋中，灌裝體積為100mL，使用制袋罐裝焊蓋生產(chǎn)線上的自動焊蓋將之密封，每臺灌裝機至少焊接200個樣品;并將每臺灌裝機制作好的樣品做標(biāo)記，在115℃、30min條件下滅菌。

4微生物侵入試驗

4．1試驗預(yù)培養(yǎng)操作步驟

在兩臺灌裝機生產(chǎn)的所有樣品中取樣，取樣數(shù)量必須大于50個，分別掰去雙閥，并在試驗操作時確保不能破壞密封口，如有不慎損壞容器密封性的應(yīng)剔除，確保去除雙閥后密封口完好的樣品不能少于50個。將正常試樣和去除雙閥的試樣倒置侵入配制好的菌溶液中，使培養(yǎng)基與容器表面充分接觸，并保持豎放狀態(tài)，在30～35℃環(huán)境條件下培養(yǎng)14天。培養(yǎng)過程中密切觀察所有試樣均不應(yīng)長菌，第14天時隨機取40支雙閥完好的試樣(兩臺灌裝機灌裝的樣品各20袋)，在每個試樣內(nèi)均接種銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)菌液，接種體積為0．1mL，菌液濃度應(yīng)滿足每0．1mL含菌量為10～100CFU的濃度要求，置30～35℃溫度條件下再培養(yǎng)7天。再次培養(yǎng)至第7天時，鑒定并確認(rèn)試樣容器內(nèi)生長的菌是否為接入的銅綠假單胞菌，鑒定試驗依據(jù)為銅綠假單胞菌經(jīng)革蘭氏染色后肉湯在紫外燈下應(yīng)顯藍綠色熒光，鑒定結(jié)果均符合預(yù)期要求，并在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)特性符合銅綠假單胞菌的特有結(jié)構(gòu)特征，證明容器內(nèi)生長的菌即為人工接入的銅綠假單胞菌，且生長良好。試樣預(yù)培養(yǎng)和營養(yǎng)試驗觀察記錄見圖2。根據(jù)以上結(jié)果，所有接種的銅綠試樣，容器內(nèi)生長的菌均為銅綠假單胞菌，且微生物都生長良好，則培養(yǎng)基的促進生長能力判斷合格，預(yù)培養(yǎng)實驗滿足預(yù)期要求。

4．2微生物侵入試驗操作步驟(應(yīng)進行三次，驗證重現(xiàn)性)

每臺灌裝機生產(chǎn)的樣品各取50個試樣(將每臺灌裝機生產(chǎn)的樣品分別分組，1號灌裝機生產(chǎn)的為A1組，2號灌裝機生產(chǎn)的為A2組)，同時在每臺灌裝機生產(chǎn)的樣品中另外各取25個試樣，并掰去除雙閥(1號灌裝機生產(chǎn)的為B1組，2號灌裝機生產(chǎn)的為B2組)，將新鮮的銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)的菌懸液倒入合適的容器中，將A1、A2和B1、B2試樣的外表面完全泡在菌懸液中，并確保試樣容器內(nèi)的無菌培養(yǎng)基充分接觸容器的封口內(nèi)表面，保持上述狀態(tài)，并將上述4組試樣在菌懸液中持續(xù)浸泡約4小時。浸泡操作的設(shè)施和方法見圖3。圖3浸泡設(shè)施和方法示意圖浸泡4小時后，從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用75%酒精溶液消毒容器外表面，操作中應(yīng)注意不要損壞B1、B2組無雙閥試樣膠塞的密封性，置30～35℃培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內(nèi)培養(yǎng)基中微生物的生長情況。A1、B1組記錄為1－A1～1－A50、1－B1～1－B25，A2、B2組記錄為2－A1～2－A50、2－B1～2－B25，所有樣品均應(yīng)無微生物生長，記錄觀察結(jié)果。同法進行陽性對照試驗:在準(zhǔn)備A1、A2組和B1、B2組試樣的同時每組多準(zhǔn)備2個，不經(jīng)菌懸液浸泡，將其接種10～100CFU銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)，在30～35℃下培養(yǎng)7天，或者培養(yǎng)到所有試樣都呈陽性結(jié)果，培養(yǎng)后進行的A1、A2組和B1、B2組的營養(yǎng)性試驗及鑒別，所有微生物都生長良好，且均為銅綠假單胞菌，A1、B1組記錄為1－A1～1－A15，A2、B2組記錄為2－A1～2－A15。微生物侵入試驗和陽性對照試驗觀察記錄見圖4。

5結(jié)論

經(jīng)驗證，所有樣品經(jīng)微生物侵入試驗后，均無任何微生物生長，表明容器密封性良好，能夠有效阻隔銅綠假單胞菌侵入容器內(nèi)，可有效保證產(chǎn)品無菌性能。并且，該培養(yǎng)基和菌液均經(jīng)各陽性對照組驗證，陽性組內(nèi)各培養(yǎng)基微生物生長良好，且均為銅綠假單胞菌，進一步表明驗證結(jié)果有效。

6討論

藥品包裝系統(tǒng)的密封完整性是指其能夠防止所承裝的藥品的損失，并能夠阻止微生物、有害氣體，或任何其他物質(zhì)的侵入污染，從而確保藥品持續(xù)保持安全和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的能力，是藥品包裝系統(tǒng)保護性能的重要體現(xiàn)，也是能夠確保藥品在整個生命周期內(nèi)持續(xù)滿足質(zhì)量要求和安全性能的重要因素，一旦藥品一旦額的包裝系統(tǒng)密封完整性出現(xiàn)缺陷，極有可能會導(dǎo)致藥品出現(xiàn)質(zhì)量風(fēng)險，并給患者生命和健康造成損害［2］。結(jié)合企業(yè)滅菌驗證實例，根據(jù)國家局藥品審評中心在2020年相繼出臺的《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術(shù)要求》和《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南(試行)》，個人總結(jié)思考如下幾點與業(yè)內(nèi)各位同仁、企業(yè)各位同行分享:(1)密封性檢測方法應(yīng)首選確定性的檢測方法(如真空衰減法、高壓放電檢測法等)，結(jié)合微生物侵入法一并開展驗證研究。(2)最大允許泄露孔徑應(yīng)根據(jù)藥品特性來區(qū)別對待，如為一般化學(xué)藥品，其密封性滿足阻止微生物侵入即可，但對于某些對于氣體敏感的藥物，密封性即使?jié)M足無菌要求，但也可能會發(fā)生氣體交換，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性出現(xiàn)問題。(3)檢測方法靈敏度測試應(yīng)更加關(guān)注泄露孔徑方面的研究，尤其是要采用最大允許孔徑漏孔的陽性樣品進行對照研究，且其孔徑應(yīng)出具檢定報告，確?？讖降臏?zhǔn)確性，確保驗證結(jié)果的有效性。(4)車間生產(chǎn)工序是保證產(chǎn)品無菌的基本要素，但僅能代表產(chǎn)品剛生產(chǎn)完的情況，密封性驗證更要考察產(chǎn)品運輸過程中、長期穩(wěn)定性等全生命周期內(nèi)的研究考察，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。

參考文獻

［1］張艷慧．無菌制劑容器密封性測試方法［J］．化工設(shè)計通訊，2018，44(8):124．

［2］陸維怡．國內(nèi)外藥品包裝系統(tǒng)密封完整性研究與保障藥品質(zhì)量安全的思考［J］．中國藥事，2021，35(7):828－834．

作者：齊鶴 單位：黑龍江省藥品審核查驗中心