導(dǎo)語：峨眉產(chǎn)味連指紋圖譜研究論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【關(guān)鍵詞】峨眉產(chǎn)味連；指紋圖譜；高效液相色譜法

Abstract：ObjectiveToestablishasensitiveandspecificHPLCmethodforthequalitycontrolofEmei''''sCoptischinensisFranch.MethodsThechromatographicfingerprintofEmei''''sCoptischinensisFranchwasobtainedbyRP-HPLC(DAD)andthegradientelutionmodewasappliedinchromatographicseparation,datawasanalyzedbyFingerprintSimilarityEvaluationSoftwaretocomparethesimilarityofsamples.ResultsTheHPLCfingerprintofEmei''''sCoptischinensisFranchwasestablishedpreliminarily,showing9characteristicpeaks,bycomparisionoftheretentiontimeofchemicalstandards,peak6,8and9wereidentifiedasJatrorrhizine,PalmatineandBerberine.ConclusionTheHPLCfingerprintmethodisrepeatableandcanbeusedforqualitycontrolofEmei''''sCoptischinensisFranch.

Keywords：Emei''''sCoptischinensisFranch；Fingerprint；HPLC

峨眉產(chǎn)味連為四川著名道地藥材，來源于毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch（習(xí)稱“味連”）的根莖，秋季采挖，除去須根及泥沙，干燥，去除殘留須根［1］。味苦、性寒，入心、肝、胃、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功能，是一種臨床應(yīng)用廣泛的清熱燥濕解毒藥，常用于濕熱痞滿、嘔吐、瀉痢、黃疸、高熱神昏、心火亢盛、牙痛、消渴及癰腫疔瘡；外治濕疹、濕瘡、耳道流膿、中耳炎等腫瘍類疾?。?～4］。味連根莖的主要成分為藥根堿(jatrorrhizine)、黃連堿(coptisine)、巴馬汀(palmatine)、小檗堿(berberine)、偽小檗堿(epiberberine)等季胺型生物堿［5］。其中小檗堿含量最高，約5%～8%，一般用這些生物堿在生藥中的含量來評(píng)價(jià)黃連的質(zhì)量，但單一成分難以反映黃連的整體特征，建立簡(jiǎn)便可行的指紋圖譜方法是目前更好評(píng)價(jià)黃連質(zhì)量的有效方法，也是中藥標(biāo)準(zhǔn)化的一項(xiàng)重要內(nèi)容。目前色譜指紋圖譜技術(shù)已成為中藥質(zhì)量控制最佳的方法之一。本研究采用反相高效液相色譜法，對(duì)四川峨眉產(chǎn)味連GAP基地主要產(chǎn)地（四川峨眉山市龍池鎮(zhèn)）的樣品進(jìn)行研究，制定出峨眉產(chǎn)味連的指紋圖譜。

1儀器與試藥

1.1儀器島津高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器，CLASS-VP色譜工作站；色譜柱：WatersRP18（4.6mm×250mm）。

1.2試劑乙腈、甲醇為色譜純（天津科密歐公司），水為超純水（實(shí)驗(yàn)室自制），其他試劑為分析純。

1.3對(duì)照品鹽酸小檗堿（批號(hào)110713-200208，供含量測(cè)定用）、鹽酸巴馬?。ㄅ?hào)0732-200005，供鑒別用）和鹽酸藥根堿對(duì)照品（批號(hào)0733-200005，供鑒別用）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

1.4樣品

味連根莖，生長(zhǎng)年限為4年，采集時(shí)間2004-12，采集地點(diǎn)為峨眉龍池，經(jīng)西南交通大學(xué)藥學(xué)院宋良科副教授鑒定為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch（味連），經(jīng)低溫干燥，粉碎，過60目篩備用。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

島津高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱：WatersRP18（4.6mm×250mm）；流動(dòng)相：乙腈-磷酸二氫鉀溶液（0.033mol/L，磷酸調(diào)pH=2.6）為流動(dòng)相梯度洗脫，流速1.0ml/min，梯度洗脫條件見表1；檢測(cè)波長(zhǎng)268nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量：供試品和對(duì)照品各10μl。表1味連指紋圖譜流動(dòng)相梯度洗脫條件（略）

2.2對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿對(duì)照品各約0.001g，加甲醇溶解并定容至10ml，制成濃度為0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，待用。

2.3供試品溶液的制備

精密稱取峨眉產(chǎn)味連樣品粉末約0.1g，用甲醇（含1%鹽酸）溶解味連樣品并定溶于25ml容量瓶中，于60℃加熱15min，超聲萃取30min，靜置過夜，用甲醇補(bǔ)足減少的溶液至刻度，用0.45μm微孔濾膜過濾，待用。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1樣品穩(wěn)定性考察

取同一份峨眉產(chǎn)味連供試品溶液分別在0，1，2，4，8，12，24，48h不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，用相似度軟件（中國(guó)藥品生物制品檢定所中藥室提供的《中藥色譜圖分析和數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)》）考察特征色譜峰的相似度，結(jié)果相似度＞0.905935，表明味連樣品供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.2儀器精密度考察

取同一份峨眉產(chǎn)味連供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，考察特征色譜峰的相似度，結(jié)果相似度＞0.927432，表明儀器精密度良好。

2.4.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批峨眉產(chǎn)味連樣品，按“2.3”項(xiàng)下供試品制備方法分別制備5份供試品，同法檢測(cè)，考察特征色譜峰的相似度，結(jié)果相似度＞0.977846，表明本法測(cè)定的重復(fù)性良好。

2.5指紋圖譜的建立

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。經(jīng)過詳細(xì)分析比較多批次味連樣品的色譜圖所給出的峰數(shù)、峰面積和相對(duì)保留時(shí)間等相關(guān)參數(shù)，確定9個(gè)特征峰構(gòu)成峨眉產(chǎn)味連的指紋圖譜，為方便分析，將整個(gè)色譜圖譜分成Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ3組。第Ⅰ組包括1～3號(hào)峰（保留時(shí)間范圍3～30min），其中1號(hào)峰為溶劑峰；第Ⅱ組包括4～7號(hào)峰（保留時(shí)間30～38min）；第Ⅲ組包括8～9號(hào)峰（保留時(shí)間38～43min）。各特征峰峰號(hào)及保留時(shí)間見表2，代表性指紋圖譜見圖1。表2特征峰峰號(hào)及保留時(shí)間（略）

3討論

建立簡(jiǎn)便有效的質(zhì)量控制方法是中藥標(biāo)準(zhǔn)化的重要內(nèi)容，也是中知藥走向世界的重要課題，本實(shí)驗(yàn)采用RP-HPLC法建立了峨眉產(chǎn)味連的指紋圖譜，方法簡(jiǎn)便重復(fù)性好，能完全分離黃連中的6個(gè)主要生物堿成分可用于峨眉味連的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：213.

［2］徐錦堂，王立群，徐蓓.黃連研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2004,26(6):704.

［3］田智勇，李振國(guó)．黃連的研究新進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15（10）：704.

［4］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990：275.

［5］黃小平，李隆云，瞿顯有，等．石柱黃連指紋圖譜研究［J］.中藥材，2006，29(7)：666．