導語：化學藥品注射劑密封性驗證探討一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

摘要:結合藥品生產(chǎn)企業(yè)化學藥品注射劑密封性驗證實例，通過模擬樣品制備、微生物侵入試驗的總體效果進行分析和總結，筆者認為該密封性驗證基本上能夠確保該生產(chǎn)線上焊蓋工序各項參數(shù)能夠有效保障產(chǎn)品的焊接密封性能，但應更加重視按照新的注射劑仿制藥一致性評價技術要求進行密封性驗證研究，包括確定性的檢測方法選擇、最大允許泄露孔徑的合理性的選擇、檢測方法靈敏度測試、藥品全生命周期內的密封性考察等。

關鍵詞:藥品;注射劑;密封性;泄露;靈敏度

注射劑在注射給藥后直接進入人體組織、甚至直接進入血液循環(huán)系統(tǒng)，所以對于注射劑的安全性要求更加嚴格，并且注射劑在開啟使用之前必須保證其無菌特性，以確保在注射劑的藥品生產(chǎn)、運輸、儲存和臨床配制應用，包括產(chǎn)品有效期內的全生命周期，以確保病人用藥安全［1］，要做到這一點，必須有容器完整性的驗證和監(jiān)測，才能確保不會受到微生物的污染。本文就某一企業(yè)化學藥品注射劑密封性驗證實例進行探討分析，并結合作者自己的幾點思考，與業(yè)內各位專家同仁、以及企業(yè)各位同行老師進行分享?，F(xiàn)將企業(yè)對于其化學藥品注射劑密封性驗證的具體情況報道如下。

1基本情況簡介

本次驗證前該車間的工藝用水系統(tǒng)、HVAC系統(tǒng)和壓縮空氣系統(tǒng)均通過相關驗證并處在受控狀態(tài);包括制袋灌裝機、水浴滅菌柜在內的所有生產(chǎn)設備均已完成相關驗證;本驗證前有關計量儀器、儀表均經(jīng)校驗合格;所需的原輔料已檢驗合格，所需生產(chǎn)設備、工器具均已清潔，所有的操作人員均已進行各項培訓，滿足GMP標準。本次容器密封系統(tǒng)的完整性試驗采用三層共擠輸液用袋包裝材料，利用生產(chǎn)線上的制袋灌裝機制備三層共擠輸液袋，同步灌裝相應裝量的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液，焊接組合蓋封口、經(jīng)水浴滅菌柜高溫高壓滅菌后，最后進行微生物侵入試驗，試驗分為4組，A1和A2組為正常的微生物侵入試驗組，B1和B2組為微生物挑戰(zhàn)試驗組，以驗證包裝材料的無菌可靠性是否能夠滿足無菌保障要求，并對所有的試驗數(shù)據(jù)進行匯總分析，以此驗證該車間制袋、焊蓋工序對注射劑密封性的保障能力，確保產(chǎn)品無菌性能。

2培養(yǎng)基靈敏度試驗

為確定胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)能夠支持較寬的微生物菌譜范圍，能促進革蘭氏陽性、革蘭氏陰性，酵母菌和霉菌的生長，對培養(yǎng)基進行靈敏度試驗。

2．1培養(yǎng)基的配制

準確稱量胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)適量(參照計算比例為3．0g)，用適量注射用水溶解并定容至擬定的體積(參照計算比例為加注射用水至100mL)，搖勻配制成3%的胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶液備用。121℃，15分鐘進行滅菌，PH值控制在(7．3±0．2)分裝至11支25mL的試管中，每支10mL，加塞將試管口密封。

2．2培養(yǎng)基微生物生長試驗

將培養(yǎng)基分為二組并將每組試管編號(第一組6支，第二組4支，空白對照1支，每支數(shù)量10mL，且不得超過試管高度的2/5)，第一組接種100CFU/支的細菌類;第二組接種100CFU/支的霉菌類;金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等細菌和黑曲霉菌，每個菌種兩支，加塞蓋好后在23～28℃培養(yǎng)72小時;空白對照1支。

2．3靈敏度試驗結果

培養(yǎng)基微生物生長試驗培養(yǎng)記錄見圖1。圖1培養(yǎng)基微生物生長試驗培養(yǎng)記錄截圖根據(jù)以上結果，接種試管中每組全部出現(xiàn)微生物生長現(xiàn)象，空白對照管無菌生長，判定該培養(yǎng)基營養(yǎng)試驗合格，滿足培養(yǎng)基靈敏度要求。

3試驗樣品制備

準備驗證需要用到的物料及器具，具體為培養(yǎng)基:胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基干粉1250g;250mL三層共擠膜輸液用袋:400個左右;塑料輸液容器用聚丙烯接口:400個左右;塑料輸液容器用聚丙烯組合蓋:800個左右，備用。稱取胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基1250g配制成3%溶液41666mL，除菌過濾至潔凈容器中，在車間正常的生產(chǎn)環(huán)境下，模擬車間正常生產(chǎn)的各項工藝參數(shù)，將胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基罐裝入已制好的三層共擠輸液用袋中，灌裝體積為100mL，使用制袋罐裝焊蓋生產(chǎn)線上的自動焊蓋將之密封，每臺灌裝機至少焊接200個樣品;并將每臺灌裝機制作好的樣品做標記，在115℃、30min條件下滅菌。

4微生物侵入試驗

4．1試驗預培養(yǎng)操作步驟

在兩臺灌裝機生產(chǎn)的所有樣品中取樣，取樣數(shù)量必須大于50個，分別掰去雙閥，并在試驗操作時確保不能破壞密封口，如有不慎損壞容器密封性的應剔除，確保去除雙閥后密封口完好的樣品不能少于50個。將正常試樣和去除雙閥的試樣倒置侵入配制好的菌溶液中，使培養(yǎng)基與容器表面充分接觸，并保持豎放狀態(tài)，在30～35℃環(huán)境條件下培養(yǎng)14天。培養(yǎng)過程中密切觀察所有試樣均不應長菌，第14天時隨機取40支雙閥完好的試樣(兩臺灌裝機灌裝的樣品各20袋)，在每個試樣內均接種銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)菌液，接種體積為0．1mL，菌液濃度應滿足每0．1mL含菌量為10～100CFU的濃度要求，置30～35℃溫度條件下再培養(yǎng)7天。再次培養(yǎng)至第7天時，鑒定并確認試樣容器內生長的菌是否為接入的銅綠假單胞菌，鑒定試驗依據(jù)為銅綠假單胞菌經(jīng)革蘭氏染色后肉湯在紫外燈下應顯藍綠色熒光，鑒定結果均符合預期要求，并在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)特性符合銅綠假單胞菌的特有結構特征，證明容器內生長的菌即為人工接入的銅綠假單胞菌，且生長良好。試樣預培養(yǎng)和營養(yǎng)試驗觀察記錄見圖2。根據(jù)以上結果，所有接種的銅綠試樣，容器內生長的菌均為銅綠假單胞菌，且微生物都生長良好，則培養(yǎng)基的促進生長能力判斷合格，預培養(yǎng)實驗滿足預期要求。

4．2微生物侵入試驗操作步驟(應進行三次，驗證重現(xiàn)性)

每臺灌裝機生產(chǎn)的樣品各取50個試樣(將每臺灌裝機生產(chǎn)的樣品分別分組，1號灌裝機生產(chǎn)的為A1組，2號灌裝機生產(chǎn)的為A2組)，同時在每臺灌裝機生產(chǎn)的樣品中另外各取25個試樣，并掰去除雙閥(1號灌裝機生產(chǎn)的為B1組，2號灌裝機生產(chǎn)的為B2組)，將新鮮的銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)的菌懸液倒入合適的容器中，將A1、A2和B1、B2試樣的外表面完全泡在菌懸液中，并確保試樣容器內的無菌培養(yǎng)基充分接觸容器的封口內表面，保持上述狀態(tài)，并將上述4組試樣在菌懸液中持續(xù)浸泡約4小時。浸泡操作的設施和方法見圖3。浸泡4小時后，從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用75%酒精溶液消毒容器外表面，操作中應注意不要損壞B1、B2組無雙閥試樣膠塞的密封性，置30～35℃培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內培養(yǎng)基中微生物的生長情況。A1、B1組記錄為1－A1～1－A50、1－B1～1－B25，A2、B2組記錄為2－A1～2－A50、2－B1～2－B25，所有樣品均應無微生物生長，記錄觀察結果。同法進行陽性對照試驗:在準備A1、A2組和B1、B2組試樣的同時每組多準備2個，不經(jīng)菌懸液浸泡，將其接種10～100CFU銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)，在30～35℃下培養(yǎng)7天，或者培養(yǎng)到所有試樣都呈陽性結果，培養(yǎng)后進行的A1、A2組和B1、B2組的營養(yǎng)性試驗及鑒別，所有微生物都生長良好，且均為銅綠假單胞菌，A1、B1組記錄為1－A1～1－A15，A2、B2組記錄為2－A1～2－A15。微生物侵入試驗和陽性對照試驗觀察記錄見圖4。

5結論

經(jīng)驗證，所有樣品經(jīng)微生物侵入試驗后，均無任何微生物生長，表明容器密封性良好，能夠有效阻隔銅綠假單胞菌侵入容器內，可有效保證產(chǎn)品無菌性能。并且，該培養(yǎng)基和菌液均經(jīng)各陽性對照組驗證，陽性組內各培養(yǎng)基微生物生長良好，且均為銅綠假單胞菌，進一步表明驗證結果有效。

6討論

藥品包裝系統(tǒng)的密封完整性是指其能夠防止所承裝的藥品的損失，并能夠阻止微生物、有害氣體，或任何其他物質的侵入污染，從而確保藥品持續(xù)保持安全和質量標準要求的能力，是藥品包裝系統(tǒng)保護性能的重要體現(xiàn)，也是能夠確保藥品在整個生命周期內持續(xù)滿足質量要求和安全性能的重要因素，一旦藥品一旦額的包裝系統(tǒng)密封完整性出現(xiàn)缺陷，極有可能會導致藥品出現(xiàn)質量風險，并給患者生命和健康造成損害［2］。結合企業(yè)滅菌驗證實例，根據(jù)國家局藥品審評中心在2020年相繼出臺的《化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價技術要求》和《化學藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術指南(試行)》，個人總結思考如下幾點與業(yè)內各位同仁、企業(yè)各位同行分享:(1)密封性檢測方法應首選確定性的檢測方法(如真空衰減法、高壓放電檢測法等)，結合微生物侵入法一并開展驗證研究。(2)最大允許泄露孔徑應根據(jù)藥品特性來區(qū)別對待，如為一般化學藥品，其密封性滿足阻止微生物侵入即可，但對于某些對于氣體敏感的藥物，密封性即使?jié)M足無菌要求，但也可能會發(fā)生氣體交換，導致產(chǎn)品質量和穩(wěn)定性出現(xiàn)問題。(3)檢測方法靈敏度測試應更加關注泄露孔徑方面的研究，尤其是要采用最大允許孔徑漏孔的陽性樣品進行對照研究，且其孔徑應出具檢定報告，確保孔徑的準確性，確保驗證結果的有效性。(4)車間生產(chǎn)工序是保證產(chǎn)品無菌的基本要素，但僅能代表產(chǎn)品剛生產(chǎn)完的情況，密封性驗證更要考察產(chǎn)品運輸過程中、長期穩(wěn)定性等全生命周期內的研究考察，以確保產(chǎn)品質量。

參考文獻

［1］張艷慧．無菌制劑容器密封性測試方法［J］．化工設計通訊，2018，44(8):124．

［2］陸維怡．國內外藥品包裝系統(tǒng)密封完整性研究與保障藥品質量安全的思考［J］．中國藥事，2021，35(7):828－834．

作者：齊鶴 單位：黑龍江省藥品審核查驗中心