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摘要：對金芍膠囊的醇提工藝進行優(yōu)選。以鹽酸小檗堿的含量和得膏率為考查指標，采用正交試驗法對提取工藝進行優(yōu)選。與乙醇用量、提取次數(shù)相比，乙醇濃度對鹽酸小檗堿的提取影響較大，優(yōu)選出的最佳提取工藝為：采用為藥材8、6倍量的體積分數(shù)70%乙醇分別回流提取2次，每次1h。該工藝鹽酸小檗堿提取率較高，有較好的穩(wěn)定性，且工藝簡便經(jīng)濟，適合于生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：金芍膠囊鹽酸小檗堿正交試驗色譜法高壓液

金芍膠囊是廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心與廣東德鑫制藥有限公司合作開發(fā)的中藥6類新藥，主要由赤芍、當歸、莪術(shù)、黃柏、延胡索、香附、菝葜、千斤拔等13味藥物組成。其功能為理氣化瘀止痛、燥濕健脾，用于治療氣滯血瘀所致婦女下腹脹痛或刺痛、腰骶酸痛、經(jīng)行加重、白帶異常等癥及慢性盆腔炎見上述癥候者。

本研究采用正交試驗設(shè)計優(yōu)選金芍膠囊中黃柏、延胡索、莪術(shù)、蒼術(shù)、當歸、香附等藥材的最佳醇提工藝。方中黃柏為抗菌消炎的主要藥物，鹽酸小檗堿為黃柏的主要有效成分之一［1］，因此以黃柏中鹽酸小檗堿含量和提取得膏率為指標，對金芍膠囊醇提工藝進行優(yōu)選，為金芍膠囊生產(chǎn)工藝提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

一、儀器與試劑

Agilent1100高效液相色譜儀(HPLC，美國安捷倫科技公司)，DAD檢測器，Agilent1100化學(xué)工作站；BP110S電子天平(德國賽多利斯公司)，CP225D電子天平(德國賽多利斯公司)；藥材均由廣東德鑫制藥有限公司提供；鹽酸小檗堿對照品(購自中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110713??200609)；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

二、方法與結(jié)果

1、HPLC測定提取液中鹽酸小檗堿含量

1.1色譜條件［2］色譜柱：KromasilC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相：乙腈—體積分數(shù)0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g)，流速：1.0mL/min，進樣量：10μL，檢測波長：265nm。

1.2對照品溶液的制備精密稱取在100℃干燥5h的鹽酸小檗堿對照品13.73mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，搖勻，作為對照品母液。精密量取對照品母液5.0mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，即得。

1.3黃柏藥材含量測定按文獻［2］方法測定，平行3份，測定結(jié)果為35.32、34.46、34.74g/kg，平均含量為34.84g/kg。

1.4供試品溶液的制備精密量取提取液5.0mL，置25mL量瓶中，加體積分數(shù)70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，即得。

1.5缺黃柏陰性樣品溶液的制備取缺黃柏陰性提取液，按2.1.4項下方法制備，即得。各溶液HPLC色譜圖見圖1。

2、計算方法

2.1得膏率精密量取提取液25mL，置于恒質(zhì)量蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，放入105℃的烘箱中，烘3h，取出，置干燥器中，放置30min，迅速稱定質(zhì)量，計算得膏率：w得膏＝(m干膏+蒸發(fā)皿-m蒸發(fā)皿)×V溶液總/(25×m藥材)。

2.2含量計算w含量＝（A樣×ρ對×V樣×B×1000)/(A對×m藥)，其中A樣為供試品峰面積，A對為對照品峰面積，V樣為提取液總體積（mL），ρ對為對照品濃度（mg/mL），m藥為黃柏藥材投料量（kg），B為稀釋倍數(shù)（B＝5）。

3、提取次數(shù)的篩選按處方比例取黃柏、當歸等藥材粗粉，加10倍量體積分數(shù)70%乙醇回流提取3次，每次1h，濾過。依法制備3份，按2.2項下方法分別測定各次提取率及得膏率。表1結(jié)果顯示：提取2次與3次提取率及得膏率相差不大，為了節(jié)約成本，因此確定提取次數(shù)為2次。表1提取次數(shù)篩選結(jié)果(略)

4、乙醇濃度的篩選按處方比例取黃柏、當歸等藥材粗粉，分別加入10倍量體積分數(shù)60%、70%、80%、90%的乙醇回流提取2次，每次1h，濾過，合并濾液，搖勻。平行制備3份，按下方法分別測定并計算提取率及得膏率。表2結(jié)果顯示：提取率以體積分數(shù)70%、80%乙醇最高，得膏率體積分數(shù)60%乙醇最高，體積分數(shù)90%乙醇提取率及得膏率均較低，因此確定以體積分數(shù)60%、70%、80%乙醇進行正交試驗。表2乙醇濃度的篩選結(jié)果(略)

5、正交試驗

5.1試驗設(shè)計以乙醇用量、乙醇濃度、提取時間為因素采用3因素3水平正交設(shè)計表確定最終提取工藝。見表3。表3因素水平表（略）。

5.2正交試驗方法與結(jié)果按處方比例稱取黃柏、當歸等藥材粗粉，根據(jù)上述正交表進行試驗，按2.2項下方法分別測定提取率及得膏率，采用綜合評分法進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析(其權(quán)重指數(shù)分別為0.8、0.2)，以確定最佳提取工藝，數(shù)據(jù)及結(jié)果見表4，方差分析見表5。表5方差分析表（略）從正交試驗結(jié)果和方差分析可知，3個因素對鹽酸小檗堿的提取率無顯著性影響；得膏率中各因素的影響程度依次為B>A>C。體積分數(shù)60%乙醇提取，得膏率高但提取率較低，體積分數(shù)80%、70%乙醇提取結(jié)果相差不大，綜合考慮，確定最佳提取工藝為A3B2C1，即用體積分數(shù)70％乙醇回流提取2次，每次1h。表4正交試驗數(shù)據(jù)及結(jié)果（略）注：s綜合=s鹽酸小檗堿提取率+s得膏率；s鹽酸小檗堿提取率=p鹽酸小檗堿提取/p最大鹽酸小檗堿提取×0.8×100；s得膏率=p得膏/p得膏率最大值×0.2×100

5.3中試放大試驗按處方比例稱取黃柏、當歸等藥材粗粉，共25.5kg，加體積分數(shù)70%乙醇(8、6倍量)回流提取2次，每次1h。

表6結(jié)果顯示：中試放大試驗驗證了上述正交試驗法確認的提取工藝參數(shù)可行，其中鹽酸小檗堿的含量為30.38g/kg，提取率為87.29%。表63批中試結(jié)果（略）。

三、討論

黃柏具有抗菌消炎、降壓等作用，其藥理、臨床作用之強弱，與鹽酸小檗堿含量高低有直接關(guān)系［3］，而鹽酸小檗堿易溶于熱水、乙醇，且在濃縮過程中易損失，在中藥復(fù)方制劑中常單獨提取。據(jù)文獻報道［4-5］，對于黃柏生物堿，乙醇提取優(yōu)于酸水滲漉和水提取，乙醇回流優(yōu)于其他提取方法。本工藝選擇乙醇回流提取，能有效提取鹽酸小檗堿，且工藝簡便、經(jīng)濟。

為合理選擇正交設(shè)計各水平，先對加醇量進行了預(yù)試，由于藥材的吸附作用，通常第1次乙醇提取液比加入液減少的體積大約相當于藥材量的2倍體積，為提高生產(chǎn)時提取罐的利用率，本實驗采用第2次提取溶劑加入量比第1次少2倍量的方式（如12、10或者10、8），使提取罐的使用率高達100%。

色譜條件參照中國藥典（2005年版）一部黃柏藥材項下含量測定方法，經(jīng)試驗用于本品提取液含量測定，鹽酸小檗堿峰尖銳，分離度大于1.5，且陰性無干擾。本試驗確定的工藝簡便、穩(wěn)定，鹽酸小檗堿提取率高，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

參考文獻：

［1］王典瑜，黃巧文，廖彬初.HPLC法測定黃柏炮制前后鹽酸小檗堿的含量［J］.海峽藥學(xué)，2008，20(1)：47．

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：214.

［3］馮飛.炮制對黃柏小檗堿含量的影響［J］.中藥材，1995，18(11)：566.

［4］趙駿，齊喜紅.生物堿提取方法研究概述［J］.天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，10(4)：4.

［5］俞丹，尹蓮.黃柏總生物堿提取工藝的優(yōu)化研究［J］.海峽醫(yī)學(xué)，2008，20(7)：19.