導語：柿葉總黃酮提取工藝探究論文一文來源于網友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與試藥

1．1儀器UV－2201紫外可見分光光度計（Shimadzu）；傾斜式高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；PB203－N電子精密天平（MettlerToledo儀器上海有限公司）；AJ150L電子精密天平（MettlerinSwitzerland）。

1．2試藥實驗用藥材采自北京市昌平區(qū)，落葉晾干，經鑒定為柿樹科柿屬柿DiospyrosKakiL．f．；蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：080－9303）；AlCl3·6H2O等均為分析純。

2方法與結果

2．1因素水平表乙醇作為提取溶劑，對乙醇濃度、溶劑量及提取次數和時間3種因素進行考察，每種因素分為3個水平，結果見表1。

2.2供試品溶液的制備精密稱取柿葉最粗粉（10～22目之間）1g共9份，按照表2L9（34）正交實驗設計方案，用對應濃度和體積的乙醇回流提取相應次數和時間。回流結束后合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉移至100ml或200ml量瓶中，分別以其相應的提取溶劑定容，過微孔濾膜（0．45μm），作為供試品溶液。

表1正交設計因素水平（略）

表2L9（34）正交實驗設計及結果分析（略）

2.3對照品溶液的制備精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品0．0825g于100ml量瓶中，70％乙醇超聲溶解，定容至刻度，得蘆丁標準液0．825mg·ml－1。

2.4顯色試劑及測定波長的選擇Al（NO3）3－NaNO2－NaOH顯色法［4］：精密吸取蘆丁標準液0．5ml和供試液1＃、4＃、7＃各適量至25ml量瓶中，分別加入5％NaNO21．0ml，放置6min，然后加入10％Al（NO3）31．0ml，混勻，放置6min，再加入4．3％NaOH10ml，用70％乙醇定容至刻度，放置15min。在190～700nm范圍內掃描測定吸收光譜。

AlCl3顯色法［5］：精密吸取蘆丁標準液0．1ml和供試液1＃、4＃、7＃各適量至10ml量瓶中，分別加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min。在190～700nm范圍內掃描測定吸收光譜。

比較上述兩種顯色法，用Al（NO3）3－NaNO2－NaOH顯色后，明顯生成紅色絮狀沉淀，此法不宜采用；而AlCl3顯色后，蘆丁標準液的λmax＝410nm，3個樣品溶液的λmax＝400～410nm，故選擇AlCl3顯色后410nm測定吸光度。

2.5顯色穩(wěn)定性考察精密吸取蘆丁標準液0．3ml和供試液4＃1．0ml，依法顯色后放置不同時間，測定吸光度，結果見表3，吸光度RSD分別為0．2％和0．3％，可見蘆丁標準液和供試液4＃顯色后4h內基本穩(wěn)定。

2.6線性關系考察取蘆丁標準液1．0ml置25ml容量瓶中，用50％乙醇定容至刻度，搖勻，分別取1．0，2．0，2．5，3．0，3．5，4．0ml置10ml量瓶中，加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度搖勻，40min后于410nm處測定吸光度A值，結果見表4。線性回歸得標準曲線：A＝5．6×10－3C＋5．7×10－3，R＝0．9999，線性范圍為33．0～132．0μg／ml。

2.7樣品測定分別取9份供試品溶液適量至10ml量瓶中，加0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，搖勻，40min后于410nm處測定吸光度A值，換算為總黃酮含量（mg·g－1），如表2所示，極差分析得最佳提取工藝為A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。

表3顯色穩(wěn)定性考察（略）

表4蘆丁標準曲線的制作（略）

2.8驗證實驗精密稱取柿葉最粗粉（10～22目之間）1g5份，置于100ml錐形瓶中，按照A2B2C3條件提取，合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉移至200ml量瓶中，80％乙醇定容至刻度，過微孔濾膜，測定樣品中總黃酮的含量，結果見表5，其平均值為101．821mg·g－1，RSD＝2．1％，表明此條件重復性良好。

表5驗證實驗結果（略）

3結論與討論

3.1結論柿葉乙醇提取最佳工藝為A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。經驗證樣品中總黃酮平均含量為101．821mg·g－1（RSD＝2．1％），表明正交實驗結果可靠。

3.2討論

3.2.1預實驗采用同一方法測定柿葉水提物和乙醇提取物中總黃酮含量，結果前者顯著低于后者，根據參考文獻及上述預實驗結果，采用乙醇作為提取溶劑。

3.2.2AlCl3顯色方法與參考文獻比較未采用70℃水浴，因為實際測定兩者差異不大，不采用水浴可以減少測定步驟，減小誤差。

3.2.3預實驗采用22～48目柿葉粉回流提取，發(fā)現有爆沸現象，改為最粗粉10～22目。

【參考文獻】

［1］郭玫，董曉萍，徐文萍．柿葉的研究概況［J］．甘肅中醫(yī)學院學報，2000，17（增）：78．

［2］譚仁祥．植物成分分析［M］．北京：科學出版社，2002：486．

［3］貝偉劍，彭文烈，羅杰．柿葉黃酮的大孔樹脂分離提純富集［J］．中成藥，2005，27（3）：257．

［4］高夢祥，趙喜紅．柿葉黃酮類物質的提取工藝研究［J］．陜西農業(yè)科學，2005（3）：41．

［5］劉斌，石任兵，周素蓉．苦參湯有效部位總黃酮含量測定方法研究［J］．中國實驗方劑學雜志，2004，10（6）：24．

【摘要】目的對柿葉中總黃酮的提取工藝進行優(yōu)選。方法采用正交實驗法，以總黃酮含量（mg·g－1）為指標，對乙醇濃度、溶劑量及提取次數和時間3種因素進行了研究。結果將柿葉最粗粉用25倍80％乙醇提取4次，可以獲得較高的提取率。結論此工藝有效成分提取率較高，重現性好，穩(wěn)定可行。

【關鍵詞】柿葉總黃酮正交實驗提取工藝