導(dǎo)語：周氏回生丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與試藥

Dionex高效液相色譜儀，UVD170U，Chromeleon色譜工作站；電子天平（METTLERTOLEDO）；超聲儀（AutoscienceAS3120，功率120W，頻率40kHz）。硅膠G板、GF254板(青島海洋化工廠)；甲醇為色譜純；甲醇、三氯甲烷、乙醚、醋酸乙酯等試劑均為分析純。

麝香酮對(duì)照品(批號(hào)110719-200409)、甘草苷對(duì)照品(批號(hào)111610-200604)、沒食子酸對(duì)照品(批號(hào)110831-200302)均由中國藥品生物制品檢定所提供；周氏回生丸，購自天津安舜大藥房（批號(hào)為070201，070202，070203）；丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑等藥材購自天津安舜大藥房，經(jīng)天津藥物研究院張鐵軍研究員鑒定為正品。

2方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別研究

2.1.1丁香的薄層鑒別取本品細(xì)粉5g，加乙醚30ml，水浴回流提取1h，過濾，濾液蒸干，加1ml甲醇使溶解，作為供試品溶液；取丁香對(duì)照藥材0.1g，按供試品溶液的制備方法制得對(duì)照藥材溶液；取缺丁香的其它藥材制成的陰性樣品5g，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液液、陰性對(duì)照溶液各5μl，點(diǎn)于同一塊硅膠GF254板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(9∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，于紫外254nm下檢視。供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖1。

2.1.2木香的鑒別取本品細(xì)粉3g，加乙醚30ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，加乙醚1ml使溶解，作為供試品溶液；取木香藥材細(xì)粉0.5g，按供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，作為對(duì)照藥材溶液；取缺木香的其它藥材制成的陰性樣品3g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、木香對(duì)照藥材溶液各5μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷(5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液顯色，吹干，吹至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖1。

2.1.3檀香的鑒別取本品細(xì)粉40g，加200ml蒸餾水，置揮發(fā)油提取器中，回流提取3h，收集揮發(fā)油，揮發(fā)油加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；取檀香細(xì)粉1g，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照藥材溶液；取缺檀香的其它藥材制成的陰性樣品10g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、對(duì)照藥材溶液各10μl，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-二氯甲烷-醋酸乙酯(6∶1∶0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)清晰。在供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖1。

圖1周氏回生丸中丁香、木香、檀香的TLC圖譜（略）

2.1.4麝香的鑒別取本品細(xì)粉10g，加乙醚50ml，水浴回流提取1h，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取麝香酮對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取麝香藥材細(xì)粉0.1g，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照藥材溶液；取麝香陰性樣品20g，按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各5μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-環(huán)己烷(3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)清晰。在供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖2。

2.1.5甘草的鑒別取本品細(xì)粉5g，加甲醇50ml，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加乙醚萃取3次，20ml/次，棄去乙醚層，水層用水飽和正丁醇萃取3次，20ml/次，合并正丁醇層，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；取甘草苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作為甘草苷對(duì)照品溶液；取甘草對(duì)照藥材0.5g，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照藥材溶液；取缺甘草的其它藥材制成的陰性樣品5g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液各5μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖2。

2.1.6山慈姑的鑒別取本品細(xì)粉（過50目篩）20g，加pH=2的鹽酸30ml，超聲30min，過濾，濾液用10%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)到pH=10，再用醋酸乙酯進(jìn)行萃取3次，30ml/次，將醋酸乙酯層蒸干，加1ml甲醇使溶解，作為供試品溶液；取山慈姑對(duì)照藥材0.5g，按照供試品溶液的制備方法制得對(duì)照藥材溶液；取缺山慈姑的其它藥材制成的陰性樣品10g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照溶液各10μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶8∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液顯色，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與山慈姑對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖2。

圖2周氏回生丸中麝香、甘草、山慈姑的TLC圖譜（略）

2.2含量測(cè)定研究

2.2.1色譜條件色譜柱為DiomandTMC18(200mm×4.6mm，10μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸(5∶95)，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長273nm，柱溫30℃，理論塔板數(shù)按沒食子酸峰不低于3000。色譜圖見圖3。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成91.6μg/ml的對(duì)照品溶液，0.45μm濾過，即得。

2.2.3供試品溶液的制備取本品粉末0.15g，精密稱定，加入4mol/L的鹽酸50ml，加熱回流提取3.5h，冷卻，過濾，精密移取1ml置5ml容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4線性關(guān)系考察實(shí)驗(yàn)將上述對(duì)照品溶液稀釋成不同的濃度，依次進(jìn)樣10μl，以色譜峰面積對(duì)沒食子酸溶液的濃度作圖，并進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)，得到?jīng)]食子酸的回歸方程為Y=25.853X-4.5553,r=0.9999，線性范圍為9.16～91.6μg/ml。

2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密量取上述對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得沒食子酸的峰面積RSD為0.16％，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取070201批樣品，按供試品溶液的制備方法制得6份供試品溶液，精密量取10μl，進(jìn)樣，測(cè)得沒食子酸的峰面積RSD為0.81%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取070201批樣品，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，室溫放置，在0，2，4，8，12，24h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得沒食子酸的峰面積RSD為0.84%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

圖3沒食子酸HPLC色譜圖（略）

2.2.8回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的周氏回生丸（每克含76.02mg的沒食子酸）6份，每份0.075g，分別置于具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入2.81mg·ml-1的沒食子酸對(duì)照品溶液各1ml，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制得各供試品溶液。在上述色譜條件下測(cè)定，測(cè)得沒食子酸的平均回收率(n=6)為99.3%，RSD值為1.81%。

2.2.9樣品含量測(cè)定取周氏回生丸樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量，測(cè)得3批（批號(hào)070201，070202，070203）中沒食子酸的含量分別為7.57％，7.52％和7.51％（n＝3）。

3討論

本制劑由14味中藥組成，成分比較復(fù)雜。為了更好地控制成品的質(zhì)量，我們采用薄層色譜鑒別法對(duì)其中的6味主要藥材進(jìn)行了鑒別。通過對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，并經(jīng)3批樣品實(shí)驗(yàn)證明，該方法簡(jiǎn)便易行，斑點(diǎn)分離清晰，重現(xiàn)性好，陰性對(duì)照無干擾可作為該制劑的質(zhì)量控制的方法。

本品為中藥復(fù)方制劑，五倍子為本品的君藥，沒食子酸為其主要活性成分，故選擇沒食子酸作為評(píng)價(jià)本品質(zhì)量的指標(biāo)成分?！吨袊幍洹?005版給出了五倍子中的沒食子酸含量測(cè)定方法，用于本制劑中，色譜分離度不好，且取樣量太大，不利于樣品回收率的測(cè)定。本研究優(yōu)化了流動(dòng)相比例、柱溫等色譜條件，并確定了合適的供試品溶液制備方法。該色譜條件下，色譜峰分離度良好，陰性無干擾，且方法簡(jiǎn)單易行，結(jié)果可靠，重復(fù)性好。

【參考文獻(xiàn)】

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【摘要】目的建立周氏回生丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括定性鑒別和定量含測(cè)兩部分。方法采用TLC法對(duì)丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對(duì)制劑中沒食子酸的含量進(jìn)行定量測(cè)定。結(jié)果在TLC色譜中能檢測(cè)出丁香、木香、檀香、麝香、甘草、山慈姑6味藥材；建立的含量測(cè)定方法中，沒食子酸的線性范圍為9.16～91.6μg/ml，平均回收率分別為99.3％。結(jié)論所建立的定性、定量方法準(zhǔn)確可行，重復(fù)性好，可作為周氏回生丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】周氏回生丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)薄層色譜高效液相色譜沒食子酸