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【摘要】目的優(yōu)選研究舒督丸的提取溶劑和提取工藝條件。方法用小鼠醋酸扭體法比較方劑水提物、乙醇提物的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)度，優(yōu)選提取溶劑；以柚皮苷提取率和水總浸出物提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)提取工藝進(jìn)行正交試驗(yàn)，優(yōu)選合理的提取工藝參數(shù)。結(jié)果以水為提取溶劑其鎮(zhèn)痛作用最顯著。最佳提取工藝條件是提取4次，每次提取時(shí)間分別為3，2，1，1h，每次加水量分別為6，4，4，2倍。結(jié)論確定的提取工藝條件能使有效成分被充分提取，保證藥效與制劑質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】舒督丸提取溶劑提取工藝柚皮苷

StudiesontheExtractionProcessofShuDuPill

Abstract：ObjectiveToselecttheextractionsolventandconditionsofShuDuPill.MethodsAceticacidwrithingmethodonmicewasusedtocomparetheanalgesiceffectsofthewaterextractandthealcoholextractorthogonaldesignwasusedtooptimizethereasonableextractionconditionswiththeevaluationmarkerssuchasnaringinextractionrateandwaterextract.ResultsTheanalgesiceffecttreatedwiththewaterextractismoresignificant.Theextractionconditionswereasfollows：themedicalmaterialwassoakedin6，4，4，2timeswaterandboiled4times,3，2，1，1hoursforeachtime.ConclusionTheextractionconditionsestablishedcanmaketheextractionrateofactivecomponentshighandmakethetherapyandqualityoptimal.

Keywords：ShuDuPill；Theextractionsolvent；Theextractionprocess；Naringin

舒督（濃縮）丸是治療強(qiáng)直性脊柱炎的中成藥，由骨碎補(bǔ)、桑寄生、狗脊、絡(luò)石藤、牛膝等藥味組成。根據(jù)強(qiáng)直性脊柱炎的病因與臨床癥狀，方劑中藥物的抗炎鎮(zhèn)痛、活血祛瘀、調(diào)節(jié)免疫功能等是其主要藥理作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［1～3］，骨碎補(bǔ)中的柚皮苷與絡(luò)石藤中的木犀草素等有抗炎作用；桑寄生中的槲皮素等具有鎮(zhèn)痛作用；牛膝中的多糖等成分有改善機(jī)體免疫功能等多種藥理活性。這些成分的溶解性較復(fù)雜。根據(jù)強(qiáng)脊炎疼痛癥狀突出的臨床表現(xiàn)，本研究以小鼠鎮(zhèn)痛藥效試驗(yàn)為指標(biāo)，對(duì)該方劑的提取溶劑進(jìn)行了篩選，并以柚皮苷提取率和水總浸出物提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選其提取工藝條件。

1器材

1.1儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜。柚皮苷中國藥品生物制品鑒定所（批號(hào)：110722200309，含量測定用）。所用試劑均為分析純，含量測定試劑為色譜純。藥材購于河南省藥材公司，骨碎補(bǔ)藥材中柚皮苷含量為0.75%。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)：SYXK（豫）20050012），雌雄各半，體重18～22g。河南省食品藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物室許可證號(hào)：SYXK（豫）20050011。動(dòng)物飼料為標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，購自北京科奧協(xié)力飼料有限公司（許可證號(hào)：SCXK（京）20050007）。

2方法與結(jié)果

2.1提取溶劑的選擇

2.1.1供試樣品的制備

按處方比例稱取藥材兩份，一份水煎煮兩次（6倍量/2h，4倍量/1h），另一份75%乙醇回流2次（6倍量/2h，4倍量/1h）過濾，合并藥液，減壓濃縮，分別制成1.0g原生藥/ml的流浸膏，密封，滅菌，備用。

2.1.2藥效試驗(yàn)

取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分組，灌胃給藥，用醋酸扭體法比較不同溶劑提取物的鎮(zhèn)痛效果［4］。結(jié)果見表1。表1舒督丸不同溶劑提取物對(duì)小鼠疼痛的抑制作用（略）

藥效試驗(yàn)結(jié)果顯示，舒督丸不同溶劑提取物均可抑制小鼠疼痛，其中以水提物鎮(zhèn)痛效果最好。因此，確定以水為提取溶劑。

2.2提取工藝因素的優(yōu)選

2.2.1柚皮苷的含量測定方法［5］

2.2.1.1色譜條件

ZOPBOXISBC18（4.6mm×200mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相甲醇醋酸水（35∶4∶65）；檢測波長283nm。

2.2.1.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取柚皮苷對(duì)照品20mg，甲醇定溶于100ml量瓶中，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每毫升含柚皮苷60μg）。

2.2.1.3供試品溶液的制備與測定

取含相當(dāng)于骨碎補(bǔ)0.3g的提取液，稀硫酸調(diào)pH值3～4,水浴蒸干，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl,注入液相色譜儀,于283nm處測定并計(jì)算柚皮苷含量，計(jì)算提取率。

2.2.2水總浸出物的測定方法

分別精密量取水提藥液各25ml，按浸出物測定法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄XA）操作，以25ml提取液相當(dāng)于原藥材量作為分母，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的浸出率。

2.2.3提取工藝因素與水平的正交實(shí)驗(yàn)選擇加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)3個(gè)因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，見表2。用L9（34）正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。表2實(shí)驗(yàn)因素水平表（略）

取復(fù)方飲片9份，每份354g，按表3正交表設(shè)計(jì)方案進(jìn)行回流煎煮提取，合并提取液，濾過，吸取藥液適量，測定柚皮苷含量和水總浸出物量，計(jì)算提取率，見表3。表3舒督丸提取工藝正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果（略）

2.2.4舒督丸提取工藝因素的正交試驗(yàn)結(jié)果與分析結(jié)果見表3～4。表4舒督丸提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析（略）

由綜合評(píng)分直觀分析可知，上述因素中，B因素影響最明顯，應(yīng)取3水平；C因素次之，應(yīng)取3水平；A因素應(yīng)取2水平。

由上表可看出，顯著影響提取效率的工藝因素是B。取重要因素較高水平的組合，得到最佳工藝條件為：A2B3C3。即提取4次，每次分別為3，2，1，1h，每次加水量分別為6，4，4，2倍。

2.3驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

取復(fù)方飲片，按最佳工藝條件重復(fù)提取3次，測定柚皮苷和水總浸出物得率。結(jié)果見表5。表5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出:所篩選出來的工藝合理可行,穩(wěn)定可靠,具有可操作性和重現(xiàn)性。

3討論

3.1舒督丸方劑中有效成分既有水溶性，也有脂溶性的，理論上既需要用親脂性溶劑也需要用水提取，才能使有效成分充分溶出。但是復(fù)方中各藥材成分間在提取時(shí)往往會(huì)發(fā)生復(fù)雜的相互作用，從而使有效成分溶解度及存在狀態(tài)發(fā)生變化影響到藥效。因此，采用藥效學(xué)方法篩選提取溶劑,與常規(guī)的化學(xué)法相比,其篩選結(jié)果與臨床用藥效果更為接近。本實(shí)驗(yàn)以小鼠醋酸扭體法比較該方劑水和乙醇為溶劑的提取物的鎮(zhèn)痛效果，結(jié)果表明以水為溶劑效果優(yōu)于乙醇，與該藥原配制用溶劑產(chǎn)生的療效一致。

3.2由藥材成分浸出原理可知，溶劑對(duì)藥材的浸潤與滲透、溶解與解吸和成分?jǐn)U散置換過程，在第1次提取即已經(jīng)完成，后續(xù)的多次提取，主要是更換溶劑，保持濃度差。所以，在本研究中，每個(gè)煎煮時(shí)間和加水量水平設(shè)計(jì)為依次遞減。結(jié)果證明優(yōu)化出的提取工藝參數(shù)可以使有效成分達(dá)到較高的提取率，節(jié)省了大量的工時(shí)，降低了水和能耗。

3.3在柚皮苷含量測定時(shí)發(fā)現(xiàn)復(fù)方提取物中柚皮苷提取率很低，與其溶解性能不符。通過對(duì)方中骨碎補(bǔ)與其他藥材兩兩配伍提取實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，是由于其與桑寄生中某成分形成了水溶性絡(luò)合物，影響了柚皮苷的含量測定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該絡(luò)合物在酸性溶液中能夠迅速解離，可以避免對(duì)柚皮苷含量測定的干擾，故在測定復(fù)方中柚皮苷含量時(shí)，需用稀硫酸調(diào)節(jié)溶液pH至酸性。

【參考文獻(xiàn)】

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