導(dǎo)語：如何才能寫好一篇對聯(lián)左右，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

1、貼對聯(lián)的位置，面對大門右手邊貼上聯(lián)，左手邊貼下聯(lián)。

2、這是最傳統(tǒng)的貼法，一個特例是根據(jù)橫批寫的順序來貼。

3、對聯(lián)的橫批也指示了對聯(lián)的方向，橫批從左往右寫。

4、上聯(lián)就貼在左手側(cè)，橫批從右往左寫，上聯(lián)就貼在右手側(cè)。

5、區(qū)分上下聯(lián)最主要是按照最后一個字的聲調(diào)，來進(jìn)行區(qū)分的。

篇2

1、面對大門，視自己的右手邊為上首，把對聯(lián)上聯(lián)貼在大門門框右側(cè)，把對聯(lián)下聯(lián)貼在大門門框左側(cè)。

2、對聯(lián)，漢族的傳統(tǒng)文化之一，是寫在紙、布上或刻在竹子、木頭、柱子上的對偶語句。對聯(lián)對仗工整，平仄協(xié)調(diào)，是一字一音的中華語言獨(dú)特的文化藝術(shù)形式。對聯(lián)相傳起于五代后蜀主孟昶。對聯(lián)是中國漢族傳統(tǒng)文化瑰寶。

（來源：文章屋網(wǎng) ）

篇3

關(guān)鍵詞：口語訓(xùn)練；語文教學(xué)；情操；方法

隨著教學(xué)要求的變化，教學(xué)觀念的更新，教學(xué)過程中越來越注重培養(yǎng)學(xué)生口語表達(dá)能力，《課程標(biāo)準(zhǔn)》中也對不同學(xué)段的口語訓(xùn)練提出不同的要求。眾所周知，口語表達(dá)訓(xùn)練和語文教學(xué)密不可分，它能直接影響語文教學(xué)的順利進(jìn)行和教學(xué)措施的適當(dāng)實(shí)施，語文課堂教學(xué)也是培養(yǎng)學(xué)生口語能力的一個重要的場所。因此，我們不能把口語訓(xùn)練和語文教學(xué)割裂開來.應(yīng)把它融入到語文教學(xué)中去，充分利用教學(xué)中的有利時機(jī)，有意識地培養(yǎng)學(xué)生的口語交際能力。

一、以說，說寫結(jié)合，雙管齊下

表面看，說與寫之間沒有根本聯(lián)系，但剖其內(nèi)部本質(zhì)，卻發(fā)現(xiàn)兩者有著內(nèi)在的必然聯(lián)系：說是寫的前提，是寫的準(zhǔn)備過程；寫是說的進(jìn)一步深化，是結(jié)果。因此，我們應(yīng)將兩者有效地結(jié)合起來，以說來輔助寫，以寫來帶動說，說寫結(jié)合，雙管齊下，將會收到很好的效果。例如，在教學(xué)寫景文章，當(dāng)同學(xué)們選取了校園景色作為描寫對象后，我先讓學(xué)生到校園里仔細(xì)觀察，體驗(yàn)校園景色的優(yōu)美。很多學(xué)生都看清了校園里花的種類、形態(tài)，花草掩映的景象，樹木的姿態(tài)等?；氐桨嗉?，我沒有急于讓學(xué)生考慮如何動筆，而是啟發(fā)他們將看到的景物說出來，激發(fā)說的興趣，結(jié)果，學(xué)生情緒高漲，課堂氣氛活躍。有的同學(xué)說：“我看到花壇里有各種美麗的花，黃的、粉紅的、白的，顏色各異，簡直就是花的世界。”也有的同學(xué)說：“給我印象深刻的是雪松，常青不衰，從它身上我看到了一種堅(jiān)強(qiáng)不屈的精神?！钡葘W(xué)生介紹完后，我讓他們再按自己觀察的順序，有條理地介紹校園的風(fēng)景。在前面發(fā)言的基礎(chǔ)上，學(xué)生的思維更加活躍，介紹方法不同，內(nèi)容不同，但效果很好。通過詳細(xì)的敘述，同學(xué)們心中已形成了作文的初稿。在學(xué)生余興未了時，我讓學(xué)生把各自說的內(nèi)容有條理地寫下來，不知不覺，作文的內(nèi)容已比較充實(shí)，既寫好了作文，又訓(xùn)練了學(xué)生的口語，可謂“一舉兩得”。

二、有的放矢，集中訓(xùn)練，陶冶情操

根據(jù)《課程標(biāo)準(zhǔn)》具體要求，口語訓(xùn)練應(yīng)在創(chuàng)設(shè)的具體情境中進(jìn)行，為了達(dá)到這一教學(xué)目標(biāo)，蘇教版教材中明確安排了“口語交際”的內(nèi)容。對此，教師應(yīng)充分重視，不能包辦代替，更不能敷衍了事，要有一定的目的性和針對性，因?yàn)檫@是集中訓(xùn)練學(xué)生口語能力的重要手段。在課堂上，學(xué)生大膽發(fā)言，或講事物的具體特征，或講事情的來龍去脈，或談社會的良好風(fēng)氣……在這段屬于孩子們自己的時間里，讓他們暢所欲言，既能有效地訓(xùn)練學(xué)生的口語表達(dá)，又能凈化孩子的心靈，陶冶情操，從小樹立良好的人生觀和價值觀。例如，在教學(xué)一個內(nèi)容是“某同學(xué)過生日，應(yīng)不應(yīng)該請同學(xué)吃飯”（因?yàn)槠渌瑢W(xué)都有請吃飯的現(xiàn)象）的口語交際時，我決定將課堂上絕大部分時間都由他們自己支配，讓他們自己發(fā)表看法。果然，同學(xué)們都大膽地發(fā)表自己的意見。有的同學(xué)覺得應(yīng)該請，因?yàn)閯e人都請，自己不請不好意思；有的認(rèn)為應(yīng)該請，不請別人會小看自己。針對“要請”的觀點(diǎn)，也有部分同學(xué)提出質(zhì)疑：“我們是學(xué)生，還沒有經(jīng)濟(jì)來源，拿什么來請。”“我們讀書需要錢，現(xiàn)在再請吃飯，加重父母的負(fù)擔(dān)?！薄拔覀兪菍W(xué)生，應(yīng)努力學(xué)習(xí)。”“自己從小要節(jié)約?！边@樣，雙方同學(xué)各執(zhí)一詞，激烈地辯論起來。待辯論結(jié)束后，我先肯定學(xué)生在活動中的表現(xiàn)，然后指出：“在現(xiàn)在，我們不應(yīng)該請吃飯，因?yàn)闆]有經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)。另外，我們要發(fā)揚(yáng)勤儉節(jié)約的優(yōu)良傳統(tǒng)。”這樣，既達(dá)到了訓(xùn)練口語的日的，又凈化了學(xué)生的思想，陶冶了情操。

三、形式多樣，方法靈活

語文課堂教學(xué)要訓(xùn)練學(xué)生的聽說讀寫能力，促進(jìn)學(xué)生的全面發(fā)展。而口語訓(xùn)練也應(yīng)融入到教學(xué)中，促進(jìn)教學(xué)活動的順利實(shí)施。因此，教學(xué)中應(yīng)合理地安排口語訓(xùn)練。一般來說，小學(xué)生童真無鄧，愛說愛聽，在他們平時玩?；蚺c家人、朋友交談時，會無拘無束地大膽發(fā)言。教師應(yīng)該根據(jù)學(xué)生這個特點(diǎn)，采用多種方法，利用和創(chuàng)設(shè)各種情趣，讓學(xué)生暢所欲言，說他們所說，有利于把他們由課外自發(fā)地說轉(zhuǎn)化為課內(nèi)自覺地說。

1.評論

根據(jù)課文的內(nèi)容、書寫方法或結(jié)構(gòu)，讓學(xué)生評論課文的特點(diǎn)和文章的思想，還可以讓學(xué)生對教師所讀范文進(jìn)行評論。另外，也可以對老師或?qū)W生說話的觀點(diǎn)進(jìn)行評論。

2.自我介紹

在談堂上，教師可以安排這種以自我介紹為主的活動，介紹自已的姓名、性別、出生年月、性格特點(diǎn)、愛好等，借此來訓(xùn)練學(xué)生出口成句的能力。

3.接待客人

在課堂上，教師可以創(chuàng)設(shè)接待客人的情境，組織學(xué)生進(jìn)行模擬表演，在表演中訓(xùn)練說話，要求能夠根據(jù)人物身份的不同，模仿出不同的語言、動作、神態(tài)等。這樣，既活躍了課堂氣氛，又收到很好的口語訓(xùn)練效果。

4.產(chǎn)品推銷

篇4

同學(xué)們在使館教育處老師們的指導(dǎo)下，積極地適應(yīng)環(huán)境，爭取國外導(dǎo)師的支持和幫助，最高效率、最大限度地利用豐富的學(xué)術(shù)資源和先進(jìn)的科研條件開展課題研究。經(jīng)過一段時間的學(xué)習(xí)，廣大同學(xué)深刻意識到“國家建設(shè)高水平大學(xué)公派研究生項(xiàng)目”的重大意義，意識到該項(xiàng)目是提供大量了解學(xué)術(shù)前沿和把握學(xué)科發(fā)展方向的重要機(jī)會，不但對個人發(fā)展具有重要意義，而且對于汲取新加坡高校建設(shè)和科研管理的先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，促進(jìn)中國高水平大學(xué)建設(shè)具有更加重要的意義。

中國駐新加坡使館教育處的老師們對同學(xué)們而言，既是老師又是家長，他們熱情接待每一位赴使館教育處報到的同學(xué)，使同學(xué)們雖然身在異國他鄉(xiāng)，卻強(qiáng)烈地感受到了祖國的溫暖和親人的關(guān)懷。新同學(xué)抵新不久，教育處就專門組織了“國家公派留學(xué)人員及聯(lián)合培養(yǎng)博士生座談會”。座談會上，老師講解了關(guān)于公派留學(xué)生管理的相關(guān)文件，鼓勵同學(xué)們牢記使命，刻苦鉆研，學(xué)有所成，報效祖國。會上老師還詳細(xì)介紹了新加坡的制度、文化和法律法規(guī)，對于同學(xué)們關(guān)心的問題給出了指導(dǎo)和建議。

考慮到公派學(xué)者、學(xué)生的特殊性，如訪問、留學(xué)時間相對較短，學(xué)術(shù)層次較高，管理相對獨(dú)立和集中，使館教育處老師們指導(dǎo)學(xué)生于2007年9月成立了“國家公派學(xué)者、學(xué)生聯(lián)誼會(新加坡)”(Chinese Govem-ment-funded Scholars and Students Association[in Singapore]，CGSSAS，以下簡稱聯(lián)誼會)。聯(lián)誼會作為國家公派學(xué)者和學(xué)生自我管理、自我服務(wù)的組織，在廣大學(xué)者、學(xué)生與使館教育處之間發(fā)揮紐帶橋梁作用，搭建同學(xué)之間交流生活、學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)，共享信息資源的平臺，在使館教育處的指導(dǎo)下開展工作，為公派學(xué)者和學(xué)生服務(wù)。作為在國外建立公派學(xué)者、學(xué)生組織的一次嘗試，聯(lián)誼會在工作中進(jìn)行組織建設(shè)，在實(shí)踐中不斷積累經(jīng)驗(yàn)，目前已經(jīng)初步建立了組織，制度，并開展了富有成效的工作。

聯(lián)誼會在建立之初，集中進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)平臺的建設(shè)，先后建立了聯(lián)誼會論壇“留學(xué)心園”(http：//vrhere.省略/)，開通了聯(lián)誼會博客(http：//v-Fhere.blog.省略/)，通過網(wǎng)絡(luò)工具促進(jìn)廣大公派學(xué)者學(xué)生進(jìn)行思想、經(jīng)驗(yàn)交流，促進(jìn)信息共享。目前，“留學(xué)心園”論壇集中了大量關(guān)于新加坡留學(xué)生活經(jīng)驗(yàn)，留學(xué)生學(xué)成回國發(fā)展及其相關(guān)管理政策的實(shí)用信息，同時也有廣大同學(xué)們對于留學(xué)生活的體會和感受。

2007年9月～11月，聯(lián)誼會組織了“赴機(jī)場迎接抵新同學(xué)”的服務(wù)活動。被提供接機(jī)服務(wù)的同學(xué)達(dá)到60余人，同時廣泛開展了協(xié)助聯(lián)系住房，學(xué)校報到等相關(guān)的互助活動，得到了同學(xué)們的肯定，已經(jīng)促成了互幫互助、資源共享的良好局面。

在“歡度中秋，喜迎國慶”暨公派旅新學(xué)者學(xué)生聚會活動中，使館教育處老師蒞臨活動現(xiàn)場，與廣大學(xué)者學(xué)生共同慶祝傳統(tǒng)佳節(jié)，祝福祖國?；顒蛹ぐl(fā)了同學(xué)們的自豪感，堅(jiān)定了為國爭光的理想信念。

在課余時間，聯(lián)誼會組織了文藝、體育活動，促進(jìn)了中國文化在新加坡高校內(nèi)的傳播。

目前，聯(lián)誼會從促進(jìn)科研交流、積極參加學(xué)術(shù)活動等角度開展工作，組織活動。先后組織同學(xué)參加了“新加坡國防科技展”、“范曾教授和楊振寧教授公開演講”、“解讀當(dāng)代中國大學(xué)”等多場科技展覽會和學(xué)術(shù)報告會，開展了”慷慨激昂，論劍南洋公派留學(xué)生互訪系列活動”，討論科研思想，激發(fā)創(chuàng)新靈感，交流學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)。

聯(lián)誼會的工作不但在廣大公派學(xué)者學(xué)生中得到了廣泛肯定和一致好評，而且也吸引了一些自費(fèi)留學(xué)生同學(xué)，在共同參與活動的過程中，加深了彼此的了解，建立了友誼。

篇5

1、二傳傳球速度越來越快?？v觀近幾年來的世界排球比賽，優(yōu)秀二傳手利用單、雙手跳傳技術(shù)來升高擊球點(diǎn)、加快傳球出手速度，縮短球在空中的飛行時間，加快進(jìn)攻節(jié)奏成為明顯的特點(diǎn)。

2、二傳技術(shù)越來越具有攻擊性。當(dāng)今世界排壇二傳手作為攻擊手的隊(duì)伍普遍存在。例如：前世界冠軍古巴女排，場上6名選手都具有相當(dāng)?shù)倪M(jìn)攻能力，因此他們大膽地由原來的“四、二”配備改打“六、二”配各（就是六名攻手，其中兩位是二傳手），這正是美國男排主教練比爾預(yù)言的未來排球的陣容配備，也是未來排球的發(fā)展趨勢。其主要特點(diǎn)體現(xiàn)在二傳手的攻擊性越來越強(qiáng)。進(jìn)攻意識不斷提高，二次扣球和二次輕吊球已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。在比賽中，攻擊性強(qiáng)的二傳手不僅可以進(jìn)攻得分，而且也可以有效牽制對方的攔網(wǎng)隊(duì)員，為進(jìn)攻手突破對方攔網(wǎng)創(chuàng)造有利條件，效果十分顯著。

3、二傳的核心作用越來越突出。比賽中，二傳是教練員戰(zhàn)術(shù)意圖的直接實(shí)施者，是全隊(duì)進(jìn)攻戰(zhàn)術(shù)的發(fā)起人和組織者。是全隊(duì)由守轉(zhuǎn)攻的樞紐。在進(jìn)攻與防守轉(zhuǎn)換的銜接發(fā)揮著越來越重要的作用。二傳的核心作用越來越突出。

二、現(xiàn)代排球比賽對二傳手的要求

二傳的作用不僅要把球既穩(wěn)又準(zhǔn)地調(diào)整起來，便于本方隊(duì)員扣球；而且應(yīng)根據(jù)臨場情況靈活巧妙地運(yùn)用各種隱蔽動作，以迷惑對方，造成對方攔網(wǎng)上的錯覺和失誤，為本方進(jìn)攻隊(duì)員創(chuàng)造有利條件。因此，作為一名優(yōu)秀的二傳隊(duì)員，必須具備以下幾項(xiàng)要求：

1、良好的身體素質(zhì)和快速、靈活的移動能力。二傳手應(yīng)根據(jù)第一次傳墊球的方向、弧度、速度和落點(diǎn)準(zhǔn)確的判斷，并迅速的起動和移動，保持好人與球的位置關(guān)系。

2、視野寬廣。二傳要為本隊(duì)的進(jìn)攻創(chuàng)造好機(jī)會。因此，二傳隊(duì)員必須有寬廣的視野，才能通觀全場，胸有成竹，并在一剎那做出正確的判斷和行動，而觀察必須適時，邊移動、邊取位、邊觀察。

3、心理素質(zhì)過硬。比賽時沉著果斷、機(jī)智靈敏，戰(zhàn)術(shù)意識強(qiáng)。能準(zhǔn)確判斷對方的戰(zhàn)術(shù)意圖。了解自己每個隊(duì)員及對方的特點(diǎn)和特長，善于激勵士氣。鼓舞斗志。勝不驕，敗不餒。能在激烈的比賽中，團(tuán)結(jié)全隊(duì)不失時機(jī)地組織進(jìn)攻。

4、技術(shù)全面性和運(yùn)用技術(shù)的合理性。例如：一傳高而逼近球網(wǎng)，二傳手應(yīng)及時跳起作跳傳球。擊球部位約在額上，靠近網(wǎng)的一只手用力應(yīng)稍大，以免使球傳過球網(wǎng)。一傳離網(wǎng)較遠(yuǎn)（即調(diào)整二傳），二傳手應(yīng)迅速回撤取位，傳球時觀察好出球的位置和距離，使出球的方向與扣球手的助跑路線在網(wǎng)前形成恰當(dāng)?shù)慕徊纥c(diǎn)。一傳平快而沖向球網(wǎng)，二傳手應(yīng)迅速卡位，注意腳步站穩(wěn)，并使重心穩(wěn)定，避免觸網(wǎng)或過線犯規(guī)。傳球時，靠近球網(wǎng)的一只手要稍加大用力，以免二傳過網(wǎng)或傳球落網(wǎng)。

三、優(yōu)秀二傳手的基本訓(xùn)練方法

1、加強(qiáng)基本功訓(xùn)練?；竟κ桥徘蚣夹g(shù)的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，二傳的基本功主要包括手、腳、視野、戰(zhàn)術(shù)意識以及球性五方面內(nèi)容。其中手是關(guān)鍵，腳是基礎(chǔ)，腰是樞紐，[（視野）是向?qū)?，意識是靈魂，它們之間相互作用、相互影響。因此，二傳的基本功訓(xùn)練要求：手、腳、[（視野）、戰(zhàn)術(shù)意識和球感練習(xí)幾個方面的高度統(tǒng)一。只有抓好二傳的基本功訓(xùn)練，才能為二傳技術(shù)的提高打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

2、抓好重點(diǎn)技術(shù)與特長技術(shù)的訓(xùn)練。二傳技術(shù)的重點(diǎn)主要是指一個球隊(duì)的主要進(jìn)攻戰(zhàn)術(shù)的組織方式對二傳球的要求。競技水平高低的不同，二傳技術(shù)的重點(diǎn)也因隊(duì)而異。例如：對于水平較低的球隊(duì)來說，其二傳技術(shù)的重點(diǎn)是如何組織各種快攻戰(zhàn)術(shù)傳球；對于具備較高水平的球隊(duì)來說，其二傳技術(shù)的重點(diǎn)是在熟練組織各種快速多變戰(zhàn)術(shù)的基礎(chǔ)上，如何提高具有掩護(hù)作用的跳傳球、晃傳球以及各種二傳的假動作。同時，二傳隊(duì)員在具備能夠組織與全隊(duì)配合的各種戰(zhàn)術(shù)球基礎(chǔ)上，重點(diǎn)發(fā)展二傳的特長技術(shù)，即“絕活”技術(shù)，是現(xiàn)代排球比賽對優(yōu)秀二傳隊(duì)員的要求。

篇6

關(guān)鍵詞：形體訓(xùn)練；微課；示范；糾錯；自主探究；合作學(xué)習(xí)

形體訓(xùn)練是優(yōu)美、高雅的健身項(xiàng)目，通過長期的練習(xí)會改善神經(jīng)系統(tǒng)和大腦的功能，提高心血管系統(tǒng)功能，矯正人的形體，使每個人的形體都具有獨(dú)特的魅力。在實(shí)踐練習(xí)中形體訓(xùn)練主要通過舞蹈基礎(chǔ)練習(xí)，結(jié)合芭蕾舞、古典舞、民族民間舞等進(jìn)行綜合訓(xùn)練，以動作為語言，強(qiáng)調(diào)基本功訓(xùn)練，以達(dá)到塑造人優(yōu)美的體態(tài)，培養(yǎng)高雅的氣質(zhì)的目的。教學(xué)中教師借助微課來進(jìn)行形體訓(xùn)練會使學(xué)生耳目一新，有效地幫助學(xué)生夯實(shí)基礎(chǔ)，扎實(shí)基本功，達(dá)到糾正生活中不正確的姿態(tài)的目的，有利于學(xué)生綜合素質(zhì)的提高。

一、微課方便示范演示，展示生動形象

古人說“窈窕淑女，君子好逑”“形體不蔽，精神不散，亦可以百數(shù)”，通過這些語言可以看到形式的重要性。對于學(xué)生而言，形體訓(xùn)練可以培養(yǎng)他們超凡脫俗的氣質(zhì)，使他們看起來高貴、典雅。隨著科技的發(fā)展，在形體教學(xué)中教師亦可以融入微課，通過微課的方式來展示教學(xué)內(nèi)容，達(dá)到示范演示的目的，促進(jìn)學(xué)生更加了解動作要領(lǐng)和練習(xí)技巧，在觀看中培養(yǎng)學(xué)生的觀察力和感知能力，進(jìn)而采用模仿的方式來提高自己動作的標(biāo)準(zhǔn)性。

例如在進(jìn)行形體訓(xùn)練的基本站立姿勢，手位腳位練習(xí)，氣息動作結(jié)合練習(xí)時，教師就可以把這些基本動作錄制成一個簡單的微課，時間不用很長，5～10分鐘即可，展示出動作的要領(lǐng)和技巧。課堂學(xué)習(xí)時，教師可以通過播放微課的方式給學(xué)生進(jìn)行示范演示，使學(xué)生不僅可以掌握動作要領(lǐng)，而且還可以通過生動形象的視頻，看到標(biāo)準(zhǔn)動作，從而提高學(xué)生動作的規(guī)范性，更加標(biāo)準(zhǔn)地進(jìn)行練習(xí)。在觀看微課的過程中，學(xué)生可以了解正確的立、坐、臥和走、跑，氣息在形體訓(xùn)練中的運(yùn)用，通過模仿的方式來練習(xí)，在觀看中體會頭面部的形態(tài)和表現(xiàn)，即人的聲、容、笑、貌。微課的幫助減少了教師的重復(fù)示范和展示，方便了學(xué)生的學(xué)習(xí)，在觀察中掌握動作要領(lǐng)，提高自己的形體。在形體訓(xùn)練中，基本站姿正確與否，直接影響人各種運(yùn)動行為的美。

二、微課便于糾錯更正，體現(xiàn)動作要領(lǐng)

在傳統(tǒng)的授課方式中，教師示范后就會讓學(xué)生進(jìn)行模擬練習(xí)，學(xué)生只是按照自己的理解和認(rèn)識來模仿?？墒菍W(xué)生做的動作有些是不規(guī)范的，有些是不標(biāo)準(zhǔn)的，甚至是錯誤的。學(xué)生心中并沒有一個清晰地認(rèn)識，他們的模仿并不到位。有了微課的幫助，學(xué)生可以反復(fù)觀看視頻，在觀看中了解自己的不足和錯誤，從而自主地糾正錯誤，提高自己動作的規(guī)范性。微課短小精煉，把形體訓(xùn)練中的要點(diǎn)和重點(diǎn)通過寥寥幾句就表達(dá)的淋漓盡致，使學(xué)生可以關(guān)注要點(diǎn)，糾正自己的錯誤和不足，大大提高了學(xué)生的練習(xí)效率和學(xué)習(xí)效果。而且視頻的方式具有畫面生動形象的優(yōu)勢，方便了學(xué)生的記憶和模仿，促進(jìn)學(xué)生進(jìn)行準(zhǔn)隊(duì)形的練習(xí)，實(shí)現(xiàn)學(xué)有所得，樂在其中。例如在進(jìn)行腿的訓(xùn)練時，教師就可以把相關(guān)的包括胯的開度、腿的力量、膝的直立、腳踝關(guān)節(jié)的柔韌靈活和腳背的勾繃制作成微視頻，通過微課的方式來幫助學(xué)生糾正自己的錯誤和不足。在訓(xùn)練中，學(xué)生會圍繞著芭蕾基本元素“開、繃、直”來完成。由于剛剛接觸這些動作，學(xué)生出現(xiàn)不標(biāo)準(zhǔn)是很正常的事情。通過對于微課的觀察會促進(jìn)學(xué)生觀察細(xì)節(jié)，在細(xì)節(jié)中追問、思考、發(fā)現(xiàn)，進(jìn)而形成自己的反思，提高動作的規(guī)范性，在訓(xùn)練中形成優(yōu)雅姿態(tài)，也傳播了它們高雅的藝術(shù)精髓。在視頻微課的幫助下，學(xué)生把自己的練習(xí)情況及時地反饋給了教師，有利于教師及時地評價和指導(dǎo)，促進(jìn)學(xué)生對于動作的掌握，統(tǒng)一了學(xué)生的精神美和形體美，提高了學(xué)生的內(nèi)涵修養(yǎng)和高雅的氣質(zhì)、風(fēng)度。

三、微課適合自主探究，學(xué)習(xí)目標(biāo)明確

微課是以微視頻為核心，并整合了微教案、微課件等內(nèi)容，是一種實(shí)情境化的教學(xué)資源環(huán)境。它時間短，內(nèi)容精，展示出了學(xué)習(xí)要點(diǎn)和重點(diǎn)，促進(jìn)學(xué)生在學(xué)習(xí)過程中可以關(guān)注要點(diǎn)，提高自己的探究能力。微課是基于網(wǎng)絡(luò)教學(xué)基礎(chǔ)上的，它打破了時空的限制，學(xué)生可以借助手機(jī)、電腦來學(xué)習(xí)，并不是離開了課堂就不能學(xué)習(xí)了。這種學(xué)習(xí)模式使學(xué)生感受到了隨時隨地學(xué)習(xí)的樂趣，他們可以自主觀看，自主探究，自主練習(xí)，在實(shí)踐中提高自己的形體素質(zhì)和學(xué)習(xí)能力。通過學(xué)生的自主探究，他們會發(fā)揮自己的的個性，融入自己的理解和認(rèn)識，促進(jìn)學(xué)生潛能展現(xiàn)，大大提高了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。

例如為了提高學(xué)生的柔韌性，教可以采用對肩、腰、腿等部位的拉伸練習(xí)來實(shí)現(xiàn)。教師把教學(xué)內(nèi)容錄制成微課，課堂帶領(lǐng)學(xué)生一起學(xué)習(xí)、觀看，課下傳給學(xué)生，鼓勵學(xué)生自主探究，引導(dǎo)學(xué)生養(yǎng)成自主練習(xí)的好習(xí)慣，讓學(xué)生在探索和實(shí)踐中發(fā)展柔韌性，實(shí)現(xiàn)學(xué)生的行為美和形體美。

四、微課實(shí)現(xiàn)合作學(xué)習(xí)，圍繞微課探究

微課的內(nèi)容可以循環(huán)利用，反復(fù)利用，這大大降低了教師的重復(fù)勞動，也方便了學(xué)生分反復(fù)學(xué)習(xí)。教師可以通過微課的方式把學(xué)習(xí)內(nèi)容提供給學(xué)生，鼓勵學(xué)生通過合作學(xué)習(xí)的方式來探究學(xué)習(xí)要點(diǎn)和重點(diǎn)。合作使學(xué)生可以暢所欲言，交流彼此的經(jīng)驗(yàn)和感受，提高學(xué)生對于形體練習(xí)動作要領(lǐng)的掌握。學(xué)生可以通過一邊觀看一邊討論的方式來學(xué)習(xí)，大大提高了學(xué)生對于動作要領(lǐng)的理解，有利于學(xué)生形成自己的體會。

例如，為了提高學(xué)生的協(xié)調(diào)性、彈跳力和耐力，教師可以把舞蹈、健美操等組合動作的練習(xí)來發(fā)展學(xué)生的協(xié)調(diào)性；采用基本功中的俯臥撐、仰臥起坐、踢腿等動作練習(xí)來發(fā)展學(xué)生的力量和彈跳力；采用跑跳操等練習(xí)來提高學(xué)生的耐力。學(xué)習(xí)內(nèi)容多而復(fù)雜，使學(xué)生有些望而生畏。為了減少學(xué)生的畏懼心理，教師可以鼓勵學(xué)生合作討論，通過合作的方式來溝通、交流，表達(dá)自己的理解和認(rèn)識，進(jìn)而在你一言，我一語中提高認(rèn)識，鍛煉能力，讓學(xué)生的精力更加充沛、旺盛，使學(xué)習(xí)和工作更有節(jié)奏和效率。

總之，微課融入形體教學(xué)中給教師提供了很多方便，使學(xué)生可以隨時隨地進(jìn)行練習(xí)，改善和提高自己的形體，從而幫助學(xué)生塑造出優(yōu)美的線條和身形，培養(yǎng)學(xué)生良好的體態(tài)、優(yōu)雅的氣質(zhì)。通過微課的指導(dǎo)和幫助，學(xué)生會自主練習(xí)，提高了學(xué)生的健康水平，改善了身材的不足，實(shí)現(xiàn)學(xué)生的全面發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

篇7

【關(guān)鍵詞】 低聚原花青素；鏈脲佐菌素；糖尿病；血糖；脂質(zhì)過氧化物

【Abstract】 Objective Observing the effect of OPC on reducing blood glucose in diabetic rats.Methods The diabetic animal models were reproduced by streptozotocin （50mg/kg）abdominal cavity injection. The positive control group were treated with metformin hydrochloride （MH），［30mg/（kg·d）］，the other two treatment groups were treated with oligomeric proanthocyanidin ［50、500mg/（kg·d） respectively］， the model control and blank group were treated with NS water. After 4 weeks ， their blood samples were drawn， blood sugar and lipid peroxide were detected.Results The blood sugar and lipid peroxide did not change distinctly in the treatment groups with MH， To compare before and after treatment ，the plasmic glucose level and content of serum lipid peroxide declined distinctly in two treatment groups（P＜0.05 or P＜0.01）and 40 per cent of the models of diabetic rats were reduced.Conclusion Oligomeric proanIhocyanidin has an effect of decrease the plasmic glucose and lipid peroxide level of diabetes rats.

【Key words】 oligomeric proanthocyanidin; streptozotocin; diabetes; blood glucose

已有相當(dāng)證據(jù)表明糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展過程與氧化應(yīng)激增強(qiáng)密切相關(guān)［1，2］。馬尾松原花青素 （oligomeric proanthocyanidin，OPC）是從馬尾松樹皮中提取出來的一類多酚化合物，具有極強(qiáng)的抗氧化活性，是一種很好的自由基清除劑和脂質(zhì)過氧化抑制劑［3，4］。一次性大劑量注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）可致β細(xì)胞壞死而無胰島炎，制成無炎性1型糖尿病模型，成模后即出現(xiàn)多飲、多尿和多食表現(xiàn)，其癥狀體征與臨床病人比較相似［5］。本文建立 STZ大鼠糖尿病模型，觀察馬尾松OPC對DM病理模型血糖水平的影響，為預(yù)防和治療糖尿病的OPC藥物開發(fā)和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 主要試劑 馬尾松原花青素（OPC）：桂林萊因生物科技股份有限公司（含量98%）；鏈脲佐菌素（STZ）：美國Sigma公司；鹽酸二甲雙胍片：浙江國光生物制藥有限公司；血糖（FBG） 試劑盒、脂質(zhì)過氧化物（LPO） 試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供；檸檬酸、檸檬酸鈉等試劑均為分析純。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物 健康雌性SD大鼠，體重320～330g，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2003-0003；使用許可證號：ZYXK（浙）2003-0003。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動物模型（DM）制備 參照文獻(xiàn)方法［5］，用 0.1mol/L、pH 4.2的檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液配制成0.5％ 的溶液，一次性腹腔注射 STZ（50mg/kg）的方法復(fù)制大鼠糖尿病模型，72h（禁食12h）后測定FBG，F(xiàn)BG大于11.1mmol/L者可確定為糖尿病模型大鼠。

1.2.2 分組與給藥 造模前隨機(jī)分出10只大鼠作為正常對照組，造模后確定的DM模型大鼠隨機(jī)分為模型對照組、陽性對照組（鹽酸二甲雙胍）、OPC高劑量給藥組、OPC低劑量給藥組，每組12只。高劑量組按每日500mg/kg給藥，低劑量組按每日50mg/kg給藥，模型對照組和正常組每日灌等容量蒸餾水。陽性對照組按每日30mg/kg給藥，均于上午灌胃1次，連續(xù)治療4周。

1.3 指標(biāo)測定 各組大鼠取血前禁食12h，分別斷尾取血，供測定血清 FBG、LPO；血糖測定采用葡萄糖氧化酶法，LPO測定采用TBA法，均按試劑盒說明操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用 SPSS 11．5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行組間均數(shù)差異的 F檢驗(yàn)，每兩組間均數(shù)比較采用 q檢驗(yàn)。P

轉(zhuǎn)貼于 　2 結(jié)果

2.1 大鼠血清FBG變化 檢測結(jié)果表明，模型組動物FBG在整個實(shí)驗(yàn)過程中一直處于升高趨勢，且與正常組差異具有非常顯著性（P

2.2 血清 LPO變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。模型對照組與正常組相比，血清LPO含量明顯升高 （P

3 討論

鏈脲佐菌素通過自由基損傷β細(xì)胞，使β細(xì)胞功能受損，胰島素合成減少，引發(fā)糖尿?。?］。本研究顯示OPC具有顯著降低糖尿病大鼠血糖，干預(yù) DM 發(fā)展的作用，以高劑量作用更為顯著，其中有40%的DM大鼠FBG值恢復(fù)正常。OPC的作用可能與其強(qiáng)大抗氧化能力有關(guān)，能夠有效對抗活性氧自由基引起的β細(xì)胞毒性的作用、修復(fù)胰腺組織氧化損傷作用［7］。

從目前臨床所用的降糖藥物來看，各種西藥都有一定的局限性和肝腎功能損害、胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)，而抗糖尿病中成藥的應(yīng)用也存在著藥物組分、含量不明、療效緩慢等問題，馬尾松OPC是從天然植物中提取，具有高效、低毒、高生物利用率的特點(diǎn)，隨著世界“回歸自然”熱潮的形成，OPC有望成為一種新的安全的糖尿病預(yù)防和臨床治療藥物。

【參考文獻(xiàn)】

1 段有金．氧自由基與糖尿?。毡踞t(yī)學(xué)介紹，1999，20（7）：331-332.

2 郭婷，逢鍵粱，王曉波．氧自由基與胰島素依賴型糖尿病發(fā)病機(jī)制．國外醫(yī)學(xué)·生理、病理科學(xué)與臨床分冊，1999，19（4）：320-321.

3 吳春，陸海燕，代麗君，等．原花青素的抗氧化活性研究．哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2005，21（4）：457-460.

4 劉葉玲．原花青素的藥理學(xué)研究進(jìn)展．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2006，22（15）：2321-2322.

5 黃琛，顧志峰，曹曉蕾，等．Ⅰ型糖尿病大鼠模型建立及穩(wěn)定性研究．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，22（3）：49-51.

篇8

【摘要】 目的 探討丹參酮ⅡA(TanⅡA)對谷氨酸(Glu)聯(lián)合β淀粉樣蛋白2535 (Aβ2535)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞、Meynert核(nbM)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用。方法 培養(yǎng)PC12細(xì)胞，用MTT法觀察TanⅡA三個不同濃度(2.5、5.0、10 μmol/L)對Glu聯(lián)合Aβ2535損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用;運(yùn)用激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)技術(shù)，檢測急性分離nbM神經(jīng)元在Glu聯(lián)合Aβ誘導(dǎo)損傷時細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度(〔Ca2+〕i)變化，及不同濃度TanⅡA對這種〔Ca2+〕i變化的影響。結(jié)果 MTT檢測結(jié)果表明，TanⅡA 各組細(xì)胞活力、損傷程度與單純Aβ+Glu損傷組相比有顯著差異(P

【關(guān)鍵詞】 阿爾茨海默病;β淀粉樣蛋白;谷氨酸;Meynert基底核;PC12細(xì)胞

【Abstract】 Objective To explore the protection of TanshinoneⅡA (TanⅡA) on damage of PC12 cells and nucleus basalis of meynert (nbM) neurons induced by glutamate (Glu) and βamyloid protein 25～35 (Aβ25～35). Methods MTT assay was used to observe the protection of different dosages of Tan ⅡA(2.5， 5.0， 10 μmol/L)on cellular damage induced by Glu and Aβ2535. Laser scanning confocal microscopy (LSCM) technique was adopted to detect the change of the intracellular free calcium concentration (〔Ca2+〕i). Results There were significant differences on the cell survival and the extent of damage between the each Tan ⅡA group and Aβ+Glu group (P

【Key words】 Alzheimer′s disease (AD); βamyloid protein (Aβ); Glutamate (Glu); Nucleus basalis of Meynert (nbM); PC12 cells

目前西醫(yī)治療阿爾茨海默病(AD)主要是停留在緩解癥狀上。相比之下，祖國醫(yī)學(xué)在延緩衰老以及老年性疾病的防治方面有著豐富的理論和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，具有潛在的優(yōu)勢和廣闊的開發(fā)前景。中藥丹參〔1〕屬于活血化瘀類中藥，同時具有養(yǎng)血安神功效。丹參酮ⅡA(TanⅡA)為丹參有效成分之一，為脂溶性、櫻紅色、針狀結(jié)晶。TanⅡA分子式C19H18O3，分子量294.33，含有醌型結(jié)構(gòu)，易被氧化還原，可參與機(jī)體的多種生化反應(yīng)而有多種生物活性，如降低血液黏滯度、擴(kuò)張冠狀動脈、抗血小板聚集、清除氧自由基、抗脂質(zhì)氧化、抗腫瘤、抗菌、消炎、雌激素樣作用、保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞及改善心腦缺血等廣泛的藥理作用。在心肌缺血/灌注損傷防治中，TanⅡA具有類異搏停樣L型鈣通道阻斷劑作用〔2〕。本研究將探索TanⅡA對谷氨酸(Glu)聯(lián)合β淀粉樣蛋白2535(Aβ2535)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞、Meynert核(nbM)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用，以便為尋找有效防治AD中藥提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 TanⅡA (西安鴻生生物技術(shù)有限公司);噻唑藍(lán)(MTT)(Sigma公司);DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司);新生牛血清(杭州四季青生物工程公司);Glu、Aβ2535、Fluo3/AM、HEPES、鈣離子載體Ionomycin均購于美國Sigma公司;EGTA(Amresco)。PC12細(xì)胞為張葳蕤惠贈。實(shí)驗(yàn)動物：正常SD大鼠(10～15 d)，體重約20～30 g，雌雄不拘，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)及大鼠nbM神經(jīng)元的急性分離 PC12細(xì)胞用含有15%新生牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，隔2 d換液一次，當(dāng)細(xì)胞生長達(dá)70%～80%融合時傳代、繼續(xù)培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。急性分離nbM神經(jīng)元的方法參照文獻(xiàn)〔3，4〕：根據(jù)包新民等〔5〕所編的大鼠腦立體定位圖譜來定位nbM。大鼠在10%水合氯醛腹腔麻醉下，快速斷頭取腦，移入冰的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液(通O2)中冰浴約1 min，快速修剪后黏到標(biāo)本臺上放入切片機(jī)槽內(nèi)切活腦片，片厚400 μm，將切片移入標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液中(通O2)，孵育平衡50 min;31℃條件下，用 0.016% pronase E消化20～30 min;再移入標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液中平衡1.5～2 h，用特制的針扎取nbM，放入充氧的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液中，使用不同內(nèi)徑并經(jīng)過熱拋光的Pasteur玻璃管吹散組織塊，使之成為單細(xì)胞懸液。移細(xì)胞懸液至多聚賴氨酸預(yù)處理的Petri培養(yǎng)皿中，20 min后待神經(jīng)元完全貼附于培養(yǎng)皿上，用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液輕輕沖洗培養(yǎng)皿2～3次，洗掉未貼壁的細(xì)胞及組織碎片，繼續(xù)下一步實(shí)驗(yàn)。整個實(shí)驗(yàn)過程在20℃～26℃條件下進(jìn)行。

1.2.2 主要溶液及其配制 Aβ的“老化處理”：將Aβ2535溶解于消毒的三蒸水，37℃孵育72 h，使其變成聚集狀的Aβ，儲備濃度10 μmol/L，4℃保存，用時用DMEM培養(yǎng)液稀釋成工作濃度;TanⅡA配制：用二甲基亞砜(DMSO)避光震蕩溶解TanⅡA干粉，配成1 mmol/L儲備濃度，4℃保存;用時再和培養(yǎng)液稀釋成工作濃度;標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液(mmol/L)：NaCl 150，KCl 5，CaCl2 2，MgCl2 1，HEPES 10，葡萄糖10，將以上成分按濃度溶解于去離子水中，用Trisbase將pH值調(diào)至7.4;Fluo3/AM，用DMSO配成885 μmol/L，置20℃避光保存。

1.3 實(shí)驗(yàn)處理

1.3.1 PC12細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)處理 取對數(shù)生長期的PC12細(xì)胞，使其密度約105個/ml，每孔100 μl，接種于96孔板。實(shí)驗(yàn)分3組：空白對照組、Glu組、Aβ+Glu損傷組，Aβ+Glu損傷組又分為單純Aβ+Glu損傷組和TanⅡA組，其中TanⅡA組再分為2.5、5.0、10 μmol/L三個濃度亞組。用100 nmol/L的Aβ提前處理Aβ+Glu損傷組細(xì)胞12 h，再加入5 mmol/L Glu處理24 h，TanⅡA組將Glu和TanⅡA同時加入處理24 h，倒置顯微鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化，MTT法觀察細(xì)胞活力。其中空白對照組加等量的培養(yǎng)液代替。

1.3.2 MTT法檢測 取對數(shù)生長期的PC12細(xì)胞，使細(xì)胞密度約105個/ml，每孔100 μl，接種于96孔板。按照上述實(shí)驗(yàn)分組(每組8孔)和處理后進(jìn)行MTT 檢測：每孔加入噻唑藍(lán)(5 mg/ml)20 μl，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱孵育4 h，小心吸棄每孔的培養(yǎng)液后，每孔加入150 μl DMSO，置振蕩器震蕩至紫色結(jié)晶完全溶解，酶聯(lián)免疫檢測儀492 nm 波長，630校正參數(shù)，測定光密度(OD)值，以對照組存活率為100%作為基準(zhǔn)，來研究分析其他各組變化。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

1.3.3 大鼠nbM 神經(jīng)元〔Ca2+〕i測定 實(shí)驗(yàn)分為空白對照組和Aβ+Glu損傷組，Aβ+Glu損傷組又分為單純Aβ+Glu損傷組、TanⅡA組，其中TanⅡA組再分為2.5、5.0、10 μmol/L三個濃度亞組。nbM神經(jīng)元Fluo3/AM負(fù)載：急性分離的nbM神經(jīng)元接種于Petri培養(yǎng)皿。Petri培養(yǎng)皿加入終濃度為8.85 μmol/L的Fluo3/AM 100 μl，37℃避光孵育40 min負(fù)載。上機(jī)檢測細(xì)胞負(fù)載情況，用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液洗去負(fù)載液?！睠a2+〕i動態(tài)變化的LSCM檢測：將裝有負(fù)載好的nbM 神經(jīng)元的Petri培養(yǎng)皿置入載樣臺，在TCS SP2型激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)下動態(tài)掃描細(xì)胞熒光強(qiáng)度變化，激發(fā)波長488 nm，發(fā)射波長526 nm。首先在熒光屏的直視下找出Fluo3負(fù)載良好的細(xì)胞，觀察其熒光圖像，于靜息狀態(tài)下快速預(yù)掃描2～3 min，獲得基線值，然后用微量進(jìn)樣器加入干預(yù)因素即時進(jìn)行檢測，并繪出細(xì)胞〔Ca2+〕i變化的熒光光密度曲線圖。每40 s掃描一次，共掃描40 min。〔Ca2+〕i計(jì)算公式為：〔Ca2+〕i=Kd×〔(F-Fmin) /(Fmax-F)〕。Kd是Fluo3與Ca2+反應(yīng)的解離常數(shù)，Kd=400 nmol/L;F為所測到的熒光光密度值;Fmax為加入8 μmol/L的Ionomycin使Ca2+飽和后所測得的最大值;Fmin為加入10 mmol/L EGTA測得的最小值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，組間的顯著性采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)處理過程由SPSS13.0軟件完成。

2 結(jié) 果

2.1 各組PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果(圖1)可見對照組細(xì)胞表面光滑、光暈明顯、突起長，胞體呈梭形、錐形和橢圓形等;Glu損傷組胞漿內(nèi)有細(xì)小黒色顆粒，細(xì)胞形狀和對照組比較無明顯差異，但細(xì)胞周圍光暈減弱、細(xì)胞密度降低;經(jīng)100 nmol/L Aβ2535預(yù)處理的細(xì)胞與對照組比較變化不明顯，當(dāng)再加入5 mmol/L Glu繼續(xù)孵育24 h后，部分細(xì)胞突起回縮，胞體腫脹，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量黑色顆粒物質(zhì)，細(xì)胞密度顯著降低，個別細(xì)胞完全崩解;用不同濃度TanⅡA處理后，細(xì)胞形態(tài)接近對照組，沒有明顯變化。細(xì)胞密度比Glu損傷組明顯提高。

2.2 TanⅡA對Glu聯(lián)合Aβ2535誘導(dǎo)PC12損傷的影響 Aβ+Glu組細(xì)胞存活力比對照組降低了12.3%，有顯著性差異(P

2.3 TanⅡA對大鼠nbM 神經(jīng)元〔Ca2+〕i的影響 見表1，與空白對照組比較，Aβ+Glu組〔Ca2+〕i水平顯著升高(P

A～F：分別為空白對照組;Glu組;Aβ+Glu組;Aβ+Glu+TanⅡA 2.5、5、10 μmol/L組

圖1 各組PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化(×250)

3 討 論

制備可靠的AD模型將有助于研究、尋找AD的有效防治措施，因此建立AD動物模型和細(xì)胞模型的研究一直是國內(nèi)外學(xué)者探索的熱點(diǎn)。以往用PC12細(xì)胞模擬AD細(xì)胞模型〔6〕的報告不少，本研究應(yīng)用的細(xì)胞模型是借鑒本課題組前期研究采用原代培養(yǎng)基底前腦神經(jīng)元模擬AD細(xì)胞模型方法〔7，8〕，其特長在于：將亞毒性劑量(100 nmol/L)的Aβ2535與Glu(5 mmol/L)聯(lián)合作用于PC12細(xì)胞和急性分離nbM神經(jīng)元，在細(xì)胞水平以模擬出AD病變發(fā)生發(fā)展過程中的一個重要的側(cè)面，即與AD病相關(guān)的β淀粉樣蛋白的神經(jīng)毒性，谷氨酸的興奮性毒性的機(jī)制，為篩選開發(fā)防治AD新藥奠定了基礎(chǔ)，提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

Aβ是一個含有39～42個氨基酸的肽，為β淀粉樣蛋白前體蛋白(βAPP)水解產(chǎn)物。Aβ在腦內(nèi)沉積是AD組織病理學(xué)特征性改變。Aβ引起神經(jīng)毒性重要部位是第25～35位的氨基酸序列。Glu是哺乳動物腦內(nèi)正常的且含量最高的興奮性氨基酸，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的信號傳遞，對神經(jīng)系統(tǒng)正常功能的維持及學(xué)習(xí)記憶功能起重要的作用。研究表明興奮性氨基酸產(chǎn)生的興奮性毒性與Aβ細(xì)胞毒性有協(xié)同作用〔7，9〕。早期的Glu持續(xù)興奮作用最終可導(dǎo)致Glu能遞質(zhì)系統(tǒng)衰竭而引起Glu及其受體或受體后改變，這種變化有利于APP產(chǎn)生Aβ。突觸間隙高濃度的Glu可間接的通過酸化環(huán)境增加Aβ的聚合，導(dǎo)致具有神經(jīng)毒性的淀粉樣蛋白纖維數(shù)量增加〔10〕。生理狀態(tài)下，Glu對神經(jīng)細(xì)胞的興奮作用快速而短暫，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞去極化，產(chǎn)生興奮性突觸后電位，直接參與腦的學(xué)習(xí)和記憶活動〔11〕;病理情況下，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的興奮性/抑制性氨基酸平衡被打破，組織內(nèi)Glu濃度急劇升高，神經(jīng)元上的NMDA受體門控的通道是Glu引起的Ca2+內(nèi)流的主要途徑，當(dāng)其過度激活時可致細(xì)胞內(nèi)鈣超載，激活系列鏈?zhǔn)椒磻?yīng)直接導(dǎo)致神經(jīng)元的退行性病變和遲發(fā)性壞死。

1989年Disterhoft〔12〕提出了AD和腦老化的胞內(nèi)鈣(〔Ca2+〕i)平衡自體失衡假說，認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的生理鈣濃度是維持其正常功能所必須的，但〔Ca2+〕i的持續(xù)升高會導(dǎo)致神經(jīng)元損傷，為AD的退行性變提供了最后共同通路。本研究采用Glu聯(lián)合Aβ2535誘導(dǎo)PC12細(xì)胞、nbM神經(jīng)元損傷，一方面表現(xiàn)為PC12細(xì)胞活力降低;另一方面觀察到了nbM神經(jīng)元〔Ca2+〕i增加，提示Glu和Aβ2535聯(lián)合作用可能激活了神經(jīng)元上NMDA受體，引起Ca2+通道過度開放，Ca2+內(nèi)流增加致細(xì)胞內(nèi)鈣超載。

中藥丹參已在臨床廣泛應(yīng)用，TanⅡA是丹參提取物有效活性成分之一，文獻(xiàn)報道〔13～15〕其具有多種功效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TanⅡA能提高PC12細(xì)胞活力，LSCM觀察分析顯示TanⅡA濃度在2.5～10 μmol/L之間均可以減輕Glu聯(lián)合Aβ引起的nbM神經(jīng)元內(nèi)鈣超載。但TanⅡA對PC12細(xì)胞和nbM神經(jīng)元的神經(jīng)保護(hù)作用在本實(shí)驗(yàn)采用的濃度范圍內(nèi)不存在劑量依賴關(guān)系。本研究提示，TanⅡA通過提高細(xì)胞存活力和維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度穩(wěn)態(tài)以對抗Glu聯(lián)合Aβ2535損傷作用。TanⅡA防治AD的詳細(xì)作用及其機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

1 柴瑞震.丹參的藥理研究進(jìn)展〔J〕.中國中醫(yī)藥科技，2003;10(6)：3902.

2 徐長慶，王孝銘，范勁松，等.丹參酮ⅡA對豚鼠單個心室肌細(xì)胞跨膜電位及L型鈣電流的影響〔J〕.中國病理生理學(xué)雜志，1997;13(1)：437.

3 Arima J，Matsumoto N，Kishimoto K，et al.Spontaneous miniature outward currents in mechanically dissociated rat Meynert neurons〔J〕.J Physiol，2001;534(1)：99107.

4 朱淑娟，錢亦華，韓學(xué)哲，等.急性分離Meynert核團(tuán)神經(jīng)元方法及其應(yīng)用〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2006;26(6)：8113.

5 包新民，舒斯云.大鼠腦立體定位圖譜〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：34.

6 王亞利，宋天保，路 明，等.Aβ誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡建立阿爾茨海默病細(xì)胞模型〔J〕.西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2001;3(2)：6045.

7 錢亦華，王曉玲，朱淑娟，等.β淀粉樣蛋白增加基底前腦神經(jīng)元對谷氨酸易感性研究〔J〕.西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2005;26(6)：53640.

8 鐵亦華，任惠民.Alzheimer病細(xì)胞模型研究進(jìn)展〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述，2002;8(2)：2314.

9 Nakagami Y，Oda T.Glutamate exacerbates amyloid beta 142 induced impairment of longterm potentiation in rat hippocampal slices〔J〕.Jpn J Pha rmacol，2002;88(2)：2236.

10 Louzada PR Jr，Paula Lima AC，de Mello FG，et al.Dual role of glutamatergic neurotransmission on amyloid beta(142) aggregation and neurotoxicity in embryonic avian retina〔J〕.Neurosci Lett，2001;301 (1)：5963.

11 李愛林.谷氨酸的興奮性毒性于腦創(chuàng)傷〔J〕.國外醫(yī)學(xué)·神經(jīng)病學(xué)分冊，2005;32(3)：2314.

12 Disterhoft JF，Gispen WE，Khachaturian ZS.Calcium hypothesis of aging and dementia〔J〕.A nn N Y Acad Sci，1989;747:18.

13 鄒曉靜，孟憲芳，姚尚龍.丹參酮ⅡA對乙醇誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用〔J〕.中國藥學(xué)雜志，2006;10(41)：15536.

篇9

【關(guān)鍵詞】 泮托拉唑； 幽門螺桿菌； 慢性胃炎； 對照研究

胃炎是臨床最為常見的消化道疾病之一，是指任何病因引起的胃黏膜炎癥，常伴有上皮損傷和細(xì)胞再生。慢性胃炎的發(fā)病率較高，占接受內(nèi)鏡檢查患者中的80％～90％。Hp是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃癌和黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的重要病因。根治Hp感染至關(guān)重要，但仍有近20％的患者采用推薦的根除方案治療后，Hp仍未轉(zhuǎn)陰，其原因主要與菌株對抗生素耐藥有關(guān)［1］。近幾年來，由于幽門螺桿菌耐藥性增加，標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)治療的根除率有所下降［2］。本研究采用泮托拉唑5 d療法治療幽門螺桿菌感染的慢性胃炎，取得了較好的效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選2010年6月～2011年6月本科住院及門診有明顯異常的慢性胃炎且幽門螺桿菌陽性患者60例。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合第三次全國幽門螺桿菌感染若干問題共識制定的納入標(biāo)準(zhǔn)［3］；（2）患者有消化不良癥狀，并經(jīng)胃鏡檢查證實(shí)為慢性胃炎；（3）胃鏡胃黏膜活檢病理組織切片染色及快速尿素酶法檢測Hp均陽性；（4）治療前1個月內(nèi)未用過抗酸劑、鉍劑及抗生素。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并有心、肝、腎功能異常者；（2）妊娠期及哺乳期女性；（3）伴有哮喘、自身免疫性疾病、精神疾病等其他系統(tǒng)性疾病有可能影響觀察過程者或長期服用類固醇激素或非甾體抗炎藥者；（4）有消化性潰瘍出血或中晚期癌癥者；（5）對試驗(yàn)中任一種實(shí)驗(yàn)藥物過敏者。60例患者中，男39例，女21例。年齡25～72歲，平均43.5歲。將患者隨機(jī)入選三聯(lián)、四聯(lián)組，每組各30例。兩組患者的性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 治療組實(shí)行PAC方案：泮托拉唑40 mg(2次/d)+阿莫西林1.0 g(2次/d)+克拉霉素500 mg(2次/d)，口服7 d。四聯(lián)治療組實(shí)行PBMT方案：泮托拉唑40 mg(2次/d)+膠體次枸櫞酸鉍220 mg(2次/d)+四環(huán)素750 mg(2次/d)+甲硝唑400 mg(2次/d)，口服5 d。治療結(jié)束后至少停藥4周后復(fù)查13C-尿素呼氣試驗(yàn)，結(jié)果≤4‰為Hp陰性，表示根除成功。所有患者治療期間隨訪記錄服藥期間的不良反應(yīng)，包括頭痛、頭暈、嗜睡、惡心、食欲不佳、腹瀉、嘔吐、便秘、皮疹等，評估治療藥物的安全性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件，Hp根除率均以按實(shí)驗(yàn)方案(PP)和按意圖治療(1TT)分析表示，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

2.1 一般情況 三聯(lián)治療組30例，有1例因惡心、嘔吐自行停藥，1例患者失訪；四聯(lián)治療組30例，1例患者失訪。

2.2 根除率比較 三聯(lián)治療組根除成功18例，四聯(lián)治療組根除24例。三聯(lián)治療組ITT根除率為60.0%(18/30)，低于四聯(lián)治療組的80.0%(24/30)；三聯(lián)治療組PP根除率為64.3%(18/28)，亦低于四聯(lián)治療組的82.8%(24/29)，兩組Hp根除率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.3 安全性比較 各組患者的不良反應(yīng)無差別，均以惡心、食欲不佳較多見，腹瀉、嘔吐、皮疹較少見，且癥狀較輕，停藥后不良反應(yīng)自行消失。三聯(lián)和四聯(lián)治療組不良反應(yīng)發(fā)生率分別為53.3%(16/30)和60.0%(18/30)。

3 討論

Hp根除治療是治療慢性胃炎、消化道潰瘍等上胃腸道疾病以及不明原因的缺鐵性貧血等胃腸外疾病的重要方面。目前推薦使用的一線根除治療方案是PPI三聯(lián)，即聯(lián)合應(yīng)用質(zhì)子泵抑制劑(PPI)和兩種抗生素，抗生素一般從克拉霉素、甲硝唑和阿莫西林中選取兩種［4］。傳統(tǒng)四聯(lián)療法Hp根除率可達(dá)到90%以上，但是很少用于一線治療，多用于三聯(lián)方案根除治療失敗后的補(bǔ)救治療。四聯(lián)療法不能廣泛應(yīng)用的一個重要原因是該方案治療復(fù)雜，不良反應(yīng)發(fā)生率高，患者的依從性也較差。在抗生素選擇上，隨著克拉霉素和甲硝唑耐藥率不斷增高，對于甲硝唑、克拉霉素耐藥率較高的地區(qū)，不少研究嘗試使用左氧氟沙星、呋喃唑酮等耐藥率較低的抗生素組成新的一線治療方案，以提高Hp根除率，但不良反應(yīng)較高，效果也不是很明顯［5，6］。

有研究表明， 4 d療法療效與7 d療法相同，但費(fèi)用明顯減少，是效價比較好的方案［7］。因此本研究采用了四聯(lián)的5 d治療方案。本研究結(jié)果顯示，三聯(lián)治療組ITT根除率為60.0%，低于四聯(lián)治療組的80.0%；三聯(lián)治療組PP根除率為64.3%，低于四聯(lián)治療組的82.8%，兩組Hp根除率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明四聯(lián)療法的療效較三聯(lián)療法好，且不良事件發(fā)生率也無明顯差別，體現(xiàn)了四聯(lián)療法在根治幽門螺桿菌方面的優(yōu)勢，如患者的依從性好，三聯(lián)療法不能根除，可使用四聯(lián)療法進(jìn)行治療。

我國“第三次幽門螺桿菌感染若干問題共識報告”中指出，為提高Hp根除率，避免繼發(fā)耐藥，可以將四聯(lián)療法作為一線治療方案?？傊?，泮托拉唑、鉍劑、四環(huán)素和甲硝唑的5 d四聯(lián)方案Hp根除率高，療程更短，不良反應(yīng)少，用藥安全。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ Gradam DY.Antibiotic resistance in Helicobacter pylori:implication for therapy.Gastroentero logy,1998,115(5):1272-1277.

［2］ Villoria A,Garcia P,Calvet X,et al.Meta-analysisl high-dose proton pump inhibitors vs.standard dose in triple therapy for Helicobacter pylori eradication.Aliment Pharmacol Ther,2008,28:868-877.

［3］ 張萬岱,蕭樹求,胡伏蓮.對幽門螺桿菌若干問題的共識意見(2003,中國).中華醫(yī)學(xué)雜志，2004,84:522-523.

［4］ Chey WD,Wong BC.American college of Gastroenterology guideline on the management of helicobacter pylori infection.Am J Gastroenterol,2007,102:1808-1825.

［5］ 鄒建,董潔,于曉峰.左氧氟沙星三聯(lián)方案與常規(guī)四聯(lián)補(bǔ)救方案治療幽門螺桿菌感染的薈萃分析.世界華人消化雜志,2009,17:1160-1165.

［6］ 李予,王曉艷,沈守榮.4種三聯(lián)療法根治幽門螺桿菌的臨床療效觀察.中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2008,33:1129-1131.

篇10

[關(guān)鍵詞] 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 全反視黃酸 共培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化

BMSCs是來源于骨髓的非造血干細(xì)胞，具有多潛能分化特性。與存在倫理學(xué)爭議的胚胎干細(xì)胞及增殖能力有限的視網(wǎng)膜祖細(xì)胞相比，BMSCs以其具有自體同源性、易分離和操作簡單等顯著優(yōu)勢，成為視網(wǎng)膜細(xì)胞移植治療的理想供體。已有研究表明，視網(wǎng)膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液能夠體外誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化[1]。本研究旨在探討B(tài)MSCs誘導(dǎo)分化的條件培養(yǎng)基。

1 材料和方法

1.1 主要儀器

THERMO FORMA 3111 CO2培養(yǎng)箱（美國）；AIR-TECH BCM-1000A型生物潔凈工作臺（蘇州）；OLYMPUS 1×70熒光倒置式相差顯微鏡（日本）；OLYMPUS PMCB20攝影器材（日本）；OLYMPUS BH-2型光學(xué)顯微鏡（日本）。

1.2 試劑

DMEM/F12培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶（均為Gibco公司）、PBS粉（Sigma）、實(shí)驗(yàn)用體重為80g清潔級sD大鼠。培養(yǎng)基（DMEM、DMEM／F12）、胎牛血清（FBS）購自Gibco公司；抗體為鼠抗人角蛋白-18單克隆抗體（北京中杉公司），小鼠抗大鼠神經(jīng)元特異性標(biāo)志烯醇化酶（NSE），星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志小鼠抗大鼠單克隆抗體神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP)，光感受器特異性標(biāo)志小鼠抗大鼠單克隆抗體視紫質(zhì)(Rhodopsin)，(均為Thermo Fisher Scientific公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 hRPE細(xì)胞的取材、原代、傳代培養(yǎng)及鑒定

采用眼杯消化法[2]，沿角鞏緣后3.5mm環(huán)形剖開眼球，棄除眼前節(jié)、玻璃體及神經(jīng)視網(wǎng)膜獲得眼杯，用0.25%胰酶消化獲取HRPE細(xì)胞、15％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)，細(xì)胞接近融合狀態(tài)時進(jìn)行傳代培養(yǎng)。將第二代hRPE細(xì)胞置入六孔板中，孔板中放入18×18蓋玻片，利用免疫細(xì)胞化學(xué)EnVision法檢測角蛋白表達(dá)。

1.3.2 BMSCs的分離培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)及鑒定

清潔級SD大鼠，無菌條件下取出雙側(cè)股骨，從股骨干和脛骨干中間剪斷，用10mLDMEM/F12培養(yǎng)液+20%FBS+肝素反復(fù)沖洗骨髓腔，沖洗液經(jīng)200目不銹鋼標(biāo)準(zhǔn)篩過濾掉大的團(tuán)塊后充分吹打混勻獲取細(xì)胞懸液，接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，置于37℃ 5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。3d后首次換液，換液時倒除舊的培養(yǎng)液，加入含0.04%EDTA的PBS 4mL，37℃孵育10min，倒除PBS，加入新的完全培養(yǎng)液。當(dāng)?shù)?代MMSC細(xì)胞融合達(dá)80%~90%時，利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原CD34、CD44和CD90表達(dá)對細(xì)胞純度進(jìn)行鑒定[3]。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組

1.4.1 hRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組：取二代hRPE細(xì)胞懸浮液含2000個細(xì)胞接種在transwell六孔雙層培養(yǎng)板的上層，將BMSCs接種于下層培養(yǎng)板中，接種密度2.0×103個細(xì)胞/孔，在雙層六孔板的每孔中加入終濃度為1μmol/L的RA，同時在下層放入18mm×18mm蓋玻片進(jìn)行細(xì)胞爬片，隔天換液。（還是每日半定量換液）倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.4.2 hRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs組：取二代HRPE細(xì)胞懸浮液含2000個細(xì)胞接種在六孔transwell六孔雙層培養(yǎng)板的上層，將MSC接種于下層培養(yǎng)板中，接種密度2000個細(xì)胞/孔，同時在下層放入18 mm×18mm蓋玻片進(jìn)行細(xì)胞爬片，隔天換液。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.4.3 單獨(dú)BMSc置于六孔板中爬片

2周后取出蓋玻片進(jìn)行GFAP，NSE， Rhodopsin，細(xì)胞化學(xué)染色。

1.5 免疫細(xì)胞化學(xué)染色

將雙層六孔板中爬有HRPE和誘導(dǎo)前、后的BMSCs的玻片取出。

PBS潤洗3min×3次；

4％多聚甲醛室溫下固定20min，PBS沖洗3min ×3次；

0.1％TritonX.100室溫下處理l0min，PBS沖洗3min ×3次；

3%H2O2去離子水孵育10min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶PBS沖洗3min ×3次；

羊血清孵育20min，封閉非特異性結(jié)合，勿洗；

適當(dāng)稀釋度的一抗（角蛋白 1:300），GFAP 1:100，NSE 1:10，Rhodopsin 1:25，4℃孵育過夜，PBS沖洗3min ×3次；陰性對照片為用PBS 代替一抗；

二抗（生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體）37℃ 濕盒孵育30min，PBS沖洗；

DAB顯色6min；

蘇木素復(fù)染；

中性樹膠封片。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

將三種培養(yǎng)條件下所表達(dá)的陽性細(xì)胞進(jìn)行定量分析。利用HPIAS-2000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)對GFAP、NSE、Rhodopsin表達(dá)進(jìn)行定量分析，每個標(biāo)本隨機(jī)選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野（×400），測定每個視野下陽性反應(yīng)的平均光密度，以每個5個視野的平均光密度的平均值作為該例的測量值；同時選取至少10個隨機(jī)視野，每個視野在200倍物鏡下統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)和整個視野細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞率，測量值均以 表示，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。組間差異采用ANOVA分析。以P

2 結(jié)果

2.1 hRPE以及BMSCs的取材和原代、傳代培養(yǎng)參照文獻(xiàn)[2]、[3]報告的方法

2.2 誘導(dǎo)分化的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及鑒定

hRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組共培養(yǎng)3d后原來梭行的BMSCs 胞體已發(fā)生收縮，呈錐形，細(xì)胞邊緣變得不規(guī)整，有零星的細(xì)的突起（圖1A）。在誘導(dǎo)后14d后，BMSCs 呈漸進(jìn)性的向神經(jīng)元樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，有較多的長突起，有些長突起末端形成生長錐樣的膨大及絲性偽足呈典型的核周體形態(tài)，多極狀（圖1B）； 同時BMSC在誘導(dǎo)7D后，部分細(xì)胞發(fā)生遷移并相互之間建立突觸聯(lián)系(圖1C)。與hRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組相比，不加RA則分化細(xì)胞明顯減少，也少有建立突觸聯(lián)系的細(xì)胞（圖1D）。

A：3d×400；B:14d×400；C:7d×400；單獨(dú)BMSCs:D:×400；

GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色 E：×400; NSE免疫細(xì)胞化學(xué)染色F:×400；Rhodopsin免疫細(xì)胞化學(xué)染色G:×400；BMSCs+RA共培養(yǎng):H:7d×400。

圖1 RPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA共培養(yǎng)

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析

利用HPIAS-2000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)分別對兩種誘導(dǎo)條件下GFAP、NSE、Rhodopsin表達(dá)進(jìn)行定量分析。

3 討論

BMSCs是目前備受關(guān)注的一群具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞。具有高度可塑性，在一定誘導(dǎo)條件下具有向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、脂肪細(xì)胞以及基質(zhì)細(xì)胞等中胚層細(xì)胞分化的能力。近年來，BMSCs 向神經(jīng)細(xì)胞的分化研究受到了極大的關(guān)注。本試驗(yàn)所用到的RA是一種維生素A的代謝產(chǎn)物，它可以影響脊椎動物的發(fā)育和許多類型細(xì)胞的分化。RA常被用來進(jìn)行誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究，但機(jī)制尚不明確。RPE 細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子這些細(xì)胞因子, 包括PEDF、FGF、 TGF2β、IL21 等。其中PEDF是一種多效的神經(jīng)營養(yǎng)因子。對中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)的許多部位的神經(jīng)元具有神經(jīng)營養(yǎng)、神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)分化作用；bFGF能誘導(dǎo)體內(nèi)視網(wǎng)膜的重建，刺激所有源自中胚層的細(xì)胞以及許多源自神經(jīng)外胚層和內(nèi)胚層細(xì)胞的增生；bFGF可介導(dǎo)神經(jīng)元的分化、對光感受器具有重要的保護(hù)作用；TGF2β可在正常RPE 細(xì)胞中表達(dá)?？烧{(diào)控細(xì)胞生長、分化、細(xì)胞外基質(zhì)合成。本試驗(yàn)將三者共培養(yǎng)兩周，結(jié)果顯示：BMSCs可以高表達(dá)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元細(xì)胞特異性標(biāo)志GFAP和NSE，同時我們還驚喜地發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)分化后的BMSCs表達(dá)光感受器細(xì)胞特異性標(biāo)志Rhodopsin。這進(jìn)一步證明了，BMSCs不僅可以向非間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，還可以跨胚層由起始的中胚層向外胚層發(fā)育，這為臨床上進(jìn)一步治療視網(wǎng)膜和視神經(jīng)疾病奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Woodbury D, Schwarz EJ, Prockop DJ, et al. Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons[J]. Journal of Neuroscience Research, 2000, 61( 4 ): 364 370.