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篇1

關(guān)鍵詞：煙青蟲；初孵幼蟲；快速收集法

中圖分類號：S436.412.2+1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-3547（2016）20-0083-04

煙青蟲（Helicoverpa assulta）又稱煙草夜蛾，屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科。煙青蟲在田間主要為害煙草和辣椒，為害辣椒時，以幼蟲蛀食辣椒的葉片和花果，常年蛀果率為20%～30%，嚴(yán)重為害時，蛀果率高達(dá)30%～50%[1，2]，經(jīng)濟損失嚴(yán)重；幼蟲可鉆入果內(nèi)，啃食果皮、胎座，并在果內(nèi)綴絲，排留大量糞便，致使果實不能食用，降低商品價值。

為了降低田間煙青蟲為害，為高效防控?zé)熐嘞x提供科學(xué)基礎(chǔ)和理論指導(dǎo)，實驗室內(nèi)需要開展針對煙青蟲生物學(xué)和生態(tài)學(xué)研究、對化學(xué)藥劑的敏感度及其變異測定及毒理學(xué)參數(shù)等試驗，因此需要室內(nèi)繼代飼養(yǎng)和繁育煙青蟲試蟲種群，而抗藥性研究中還需要長期保存敏感和抗性或亞致死處理種群

等[3]。目前采用人工飼料進(jìn)行煙青蟲室內(nèi)大規(guī)模繁育和繼代保種技術(shù)已經(jīng)成功實現(xiàn)，并進(jìn)一步改進(jìn)[4]，節(jié)約了大量的人力和物力。但是在煙青蟲的種群擴繁過程中，其成蟲通常在紗布上產(chǎn)卵，當(dāng)卵孵化后，需要用細(xì)小毛筆將初孵幼蟲非常小心地從紗布上挑取到人工飼料上飼養(yǎng)，這個過程中存在較多的問題，一是人工挑蟲要特別小心，且耗時較長；二是即使非常小心，用毛筆挑取也很容易傷害或者致死初孵幼蟲，降低后代飼養(yǎng)數(shù)量；三是如果卵在夜晚孵化，則無法及時挑取初孵幼蟲到人工飼料上，而幼蟲孵化后6 h內(nèi)接觸不到飼料即餓死。因此，如何自動無傷害地收集初孵幼蟲一直是煙青蟲乃至其他鱗翅目昆蟲種群擴繁的制約因子之一。

在實驗室飼養(yǎng)煙青蟲時，常將裝有卵布的塑料袋放置在實驗臺上，發(fā)現(xiàn)孵化后的幼蟲清晨全部集聚在朝向窗戶一側(cè)，由此推測煙青蟲初孵幼蟲的趨光性較強?；诖?，擬設(shè)置黑暗的卵孵化環(huán)境，正常環(huán)境的裝有人工飼料的塑料盒作為幼蟲收集盒，二者之間采用玻璃管相通，從收集時間、幼蟲存活率和煙青蟲蛹質(zhì)量3個指標(biāo)研究比較了該方法與常規(guī)人工收集方法的不同、優(yōu)勢以及是否適合用于煙青蟲初孵化幼蟲的收集。

1 材料與方法

1.1 試蟲及人工飼料制作

試驗用蟲為采集自煙草田的煙青蟲幼蟲，室內(nèi)在人工飼料上飼養(yǎng)超過3代。人工飼料的配方參照董鈞鋒等[4]的方法，具體成分及用量見表1。

其中，大豆粉在用前經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌處理30 min，蒸熟后自然晾干，用粉碎機再次粉碎備用。麥胚粉制作方法：將小麥粒洗干凈，鋪于玻璃槽內(nèi)薄薄一層，每隔12 h灑水1次，保持小麥潮濕，當(dāng)小麥根長超過種子長度時，再次洗凈后放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中60℃干燥，最后加工成粉末備用。

人工飼料的具體制作方法如下：按表1所示份量，分別稱取各組分。先將瓊脂粉倒入不銹鋼鍋中，然后加入500 mL蒸餾水并在電磁爐上加熱，同時不斷攪拌，以確保瓊脂粉充分溶解。瓊脂粉煮沸3次后倒入九陽料理機中，加入稱量過的麥胚粉、辣椒粉、麥麩、酵母粉、熟大豆粉及亞油酸，攪拌1 min。攪拌均勻后放在超凈工作臺內(nèi)吹風(fēng)輔助降溫，待溫度降到50～60℃時，加入山梨酸、尼泊金、抗壞血酸等再次攪拌1 min，最后將攪勻的飼料倒入直徑

18 cm的滅菌玻璃培養(yǎng)皿中，置于超凈工作臺中冷卻凝固，然后放入4℃冰箱中備用。

1.2 煙青蟲飼養(yǎng)過程

試蟲在養(yǎng)蟲室內(nèi)不接觸藥劑的情況下一直飼養(yǎng)在人工飼料上。養(yǎng)蟲室室內(nèi)溫度（27±2）°C，濕度（60±10）%，光暗周期比為L/D=16 h/8 h。具體飼養(yǎng)過程如下。

①帶卵紗布消毒 將帶卵紗布放入500 mL燒杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，清水漂洗2～3次，置于超凈工作臺內(nèi)微風(fēng)吹干表面水分后放入保鮮袋中，然后放入光照恒溫培養(yǎng)箱中等待孵化。

②幼蟲飼養(yǎng) 初孵幼蟲群體飼養(yǎng)，卵孵化4 h內(nèi)，用軟毛筆將初孵幼蟲小心接入滅菌的裝有足夠人工飼料的指形管（平底）內(nèi)，每管接5頭。用滅菌的脫脂棉塞住指形管，幼蟲進(jìn)入3齡后分管飼養(yǎng)，直至幼蟲在試管中化蛹，飼料視情況更換。

③蛹 老熟幼蟲化蛹后第3 天，將健康蛹從指形管內(nèi)取出來，并將雌、雄蛹分別放入標(biāo)記過的塑料培養(yǎng)皿中（直徑90 mm）。隨后，放進(jìn)500 mL燒杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，用自來水沖洗并晾干后，按照雌雄分別放入羽化籠內(nèi)。

④成蟲 成蟲羽化后轉(zhuǎn)移到籠中，并放入浸蘸10%蜂蜜水的脫脂棉供其補充營養(yǎng)。成蟲開始在紗布上產(chǎn)卵后，每天更換卵布。

1.3 煙青蟲初孵幼蟲收集

①常規(guī)人工收集法 帶卵紗布上出現(xiàn)初孵幼蟲后，在卵孵化4 h內(nèi)，用軟毛筆將初孵幼蟲人工接入養(yǎng)蟲盒內(nèi)，養(yǎng)蟲盒內(nèi)加入足夠的人工飼料，每盒接100頭進(jìn)行群體飼養(yǎng)。該部分由2位測試者（一位是在實驗室工作超過2 a的熟練工人，另一位是在實驗室工作不超過半年的非熟練工人）分別采用毛筆人工收集幼蟲，再轉(zhuǎn)移到人工飼料上。每個測試處理重復(fù)3次。

②快速收集法 用1個四周包上黑布的黑色塑料盒子作孵化盒，將消毒后的帶卵紗布放入孵化盒中；設(shè)置第二個裝有人工飼料的幼蟲收集盒，孵化盒和幼蟲收集盒分別在接近底部的側(cè)面部位開1個圓孔，2個盒子之間用一根棕色玻璃管連接，初孵幼蟲白天基于趨光性從玻璃管中間自行爬到幼蟲收集盒的人工飼料上去取食；夜間在幼蟲收集盒旁邊放置一盞打開的LED臺燈，借助燈光誘導(dǎo)夜間孵化幼蟲爬行到幼蟲收集盒中，每個收集盒中初孵幼蟲數(shù)量達(dá)到100頭左右時及時更換另外一個新的幼蟲收集盒。該處理重復(fù)3次。

③幼蟲存活率和蛹重 將2種方法收集的煙青蟲初孵幼蟲分別飼養(yǎng)在人工飼料上，飼養(yǎng)8 d后（3齡幼蟲階段），計算存活率，存活率（%）=（初孵幼蟲數(shù)量-生長至3齡幼蟲的數(shù)量）/初孵幼蟲數(shù)量×100%。將存活幼蟲轉(zhuǎn)至指形管內(nèi)單頭飼養(yǎng)至化蛹，化蛹3 d后稱取蛹質(zhì)量；每個處理測定雌、雄蛹質(zhì)量各20頭，設(shè)3次重復(fù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

用Sigmaplot 12.0作圖、SPSS 19.0軟件分析差異顯著性（p

2 結(jié)果與分析

2.1 不同收集方法耗費時間比較

3種處理耗時差異很大。非熟練工人采用毛筆挑取100頭初孵幼蟲到飼料上需52.67 min，熟練工人挑取100頭初孵幼蟲到飼料上需31.33 min，而采用快速收集法更換幼蟲收集盒（約計100頭/盒）1次，100頭幼蟲從孵化盒中爬行到幼蟲收集盒中耗時13.43 min（圖1）。結(jié)果表明，對于收集同樣數(shù)量的幼蟲而言，快速收集法將幼蟲轉(zhuǎn)移到人工飼料上所需時間顯著少于人工挑蟲法，可節(jié)約大量人力。

2.2 不同收集方法的幼蟲存活率比較

由表2可以看出，熟練工人挑蟲的存活率平均為83.67%，個別超過85%，非熟練工人挑蟲成活率低于50%，平均為46.00%，二者之間差異顯著；而人工快速收集方法的初孵幼蟲存活率達(dá)96.33%，遠(yuǎn)高于非熟練人工挑蟲處理的，但與熟練工人挑蟲的存活率之間差異不顯著，說明該快速收集法能大大提高初孵幼蟲的存活率。

2.3 不同收集方法的蛹質(zhì)量比較

由表3可以看出，快速收集法的雌雄蛹質(zhì)量均略高于人工挑蟲處理，但不同收集方法的雌性蛹質(zhì)量之間、雄性蛹質(zhì)量之間均無顯著差異。從標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)來看，快速收集法不同蛹質(zhì)量之間的差異較小，而人工挑蟲法蛹質(zhì)量之間差異較大，說明快速收集法得到的煙青蟲蛹更加整齊。

3 小結(jié)與討論

煙青蟲成蟲趨光性強，很早就有報道[5]，田間也常利用該特點采用頻振式殺蟲燈有效誘殺煙青蟲成蟲，降低成蟲落卵率，抑制煙青蟲的繁殖[6，7]；而關(guān)于幼蟲趨光性的報道較少，張漢鵠[8]報道，大袋蛾（Clania variegata Snellen）幼蟲具有喜光性，常在灌木、矮樹等上聚集為害，但未明確不同齡期幼蟲間喜光性是否存在差異；另有研究發(fā)現(xiàn)，文山松毛蟲（Dendrolimus punctatus wenshanensis）幼蟲的趨光性強，但不同齡期幼蟲對光的敏感度差異及光源強度的高低尚需要進(jìn)一步研究[9]。

基于前期實驗室內(nèi)的多次觀察，確定煙青蟲初孵幼蟲具有朝向光源的特性，由此設(shè)計光源通道，讓初孵幼蟲自行爬向具有人工飼料的幼蟲飼養(yǎng)盒內(nèi)，大大降低了人工挑蟲耗費的大量時間和精力，同時減少了人工操作帶來的不可避免的傷害。同時，由該方法得到的初孵幼蟲存活率高，后期發(fā)育的蛹整齊度高；另外，該法可實現(xiàn)初孵幼蟲的優(yōu)勝劣汰，淘汰不能成功爬行至收集盒內(nèi)的弱小幼蟲；而夜間開啟的LED燈還可誘導(dǎo)夜間孵化的幼蟲及時爬行到人工飼料上取食，保障了實驗種群的大量優(yōu)質(zhì)擴繁。該方法可以擴展到其他具有相同特性的鱗翅目昆蟲的室內(nèi)種群飼養(yǎng)及擴繁工作中。

本研究表明，煙青蟲低齡幼蟲的趨光性強，且證實了初孵幼蟲高效快速收集方法的可行性。田間觀察也發(fā)現(xiàn)，1～2齡煙青蟲幼蟲通常在葉片和花果向陽的一側(cè)取食，3齡后為害辣椒時則多蛀食果實。生產(chǎn)上可利用此特點，抓住3齡幼蟲前這一關(guān)鍵時期，噴施無內(nèi)吸性的病毒制劑、白僵菌和微孢子蟲等生防制劑，或者釋放棉鈴蟲齒唇姬蜂（Campoletis chlorideae Uchida）[10]、中紅側(cè)溝繭蜂（Microplitis mediator Halidag）等防治煙青蟲，效果良好。

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篇2

【關(guān)鍵詞】抗氧化劑；氧自由基；消化性潰瘍；治愈率；復(fù)發(fā)率；臨床研究

消化性潰瘍（PU）是人類的常見病與多發(fā)病[1]，也是一種具有反復(fù)發(fā)作傾向的慢性疾病。其發(fā)病機制迄今尚未闡明。盡管H2受體阻滯劑（H2RB）、質(zhì)子泵抑制劑（PPI）、抗幽門螺旋桿菌（HP）的應(yīng)用使PU的治療取得很大的進(jìn)步，但停藥后復(fù)發(fā)、難以根治潰瘍?nèi)允桥R床面臨的重大問題[2]。氧自由基（OFR）近年來在諸多疾病的病理生理過程中的重要作用日漸被發(fā)現(xiàn)，其在消化系統(tǒng)疾病中的作用也得到了進(jìn)一步的揭示[3]。本次研究通過 PPI聯(lián)合抗氧化劑VitE治療消化性潰瘍，通過在臨床獲得的數(shù)據(jù)資料研究、分析、歸納，總結(jié)出最佳的治療方案，為通過清除氧自由基降低消化性潰瘍高復(fù)發(fā)率這一臨床難題提供參考?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年10月-2012年12月我院收治的消化性潰瘍患者75例，所有患者均有不同程度的反酸、噯氣、中上腹痛/脹等消化道癥狀，行電子胃鏡（富士EG250-WR5）、14C呼氣試驗（采用海得威HUBT-20A幽門螺旋桿菌測試儀）及活性組織檢查確診為Hp陽性良性消化性潰瘍，實驗前1周內(nèi)未行抗?jié)冎委煟?jīng)實驗室、B超、CT等檢查排除肝、膽、胰等器質(zhì)性病變及其他全身性疾病。其中男42例，女33例；年齡18-75歲，平均（43.6±5.1）歲。十二指腸球部潰瘍45例，胃潰瘍30例。按畸田隆夫的潰瘍分期法（A、H、S）均為A期潰瘍，其中A1期31例，A2期44例。

1.2分組方法 將75例患者按治療方法的不同平均分為2組，治療組，n=35：采用PPI+抗氧化劑治療；對照組，n=40：僅予PPI治療。2組患者在一般資料上具有可比性（P>0.05）。

1.3 治療方法 所有患者均予胃粘膜保護劑（果膠鉍/丙谷胺）和常規(guī)對癥治療（如腹脹加用胃腸動力藥）?？笻p治療：阿莫西林膠囊（珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司） 1.0g bid+克拉霉素（山東新華制藥） 0.5g bid，均為餐后服用。治療組：奧美拉唑腸溶膠囊（河南羚銳制藥股份有限公司）20mg ，bid；維生素E軟膠囊（廣東三才石歧制藥有限公司）100 mg，tid。對照組：奧美拉唑腸溶膠囊（河南羚銳制藥股份有限公司）20mg，bid。2組患者均規(guī)范用藥8-12周。治療期間囑患者忌辛、辣、酸、冷食物，按時休息，禁服其他藥物。

1.4 療效觀察 根據(jù)治療前后的臨床癥狀變化和電子胃鏡檢查結(jié)果評定療效[6-7]。1）治愈：臨床癥狀（上腹痛、反酸、呃逆）消失，胃鏡復(fù)查示潰瘍完全消失或僅留瘢痕；2）有效：臨床癥狀消失或明顯緩解，胃鏡復(fù)查示潰瘍面積縮小≥50%；3）無效：臨床癥狀無明顯改善或加重，胃鏡復(fù)查示潰瘍面積縮小

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料以（ ±s）表示，結(jié)果采用t檢驗，計數(shù)資料采用X2檢驗，以P

2結(jié)果

2.1 2組患者癥狀緩解時間、潰瘍愈合時間比較 治療組的癥狀緩解時間、潰瘍愈合時間均顯著短于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均

表1 2組患者癥狀緩解時間、潰瘍愈合時間比較（d， ±s）

組別 N 癥狀緩解時間 潰瘍愈合時間

治療組 35 11.92±5.41* 41. 83±11.01*

對照組 40 24.17±6.95 69.46±20.34

t 12.351 15.847

P 0.026 0.018

注：*與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均

2.2 2組患者臨床療效比較 治療組的療效顯著優(yōu)于對照組（P

表2 2組患者臨床療效比較[n（%）]

組別 N 治愈 有效 無效 總有效率

治療組 35 27（77.14） 5（17.54） 2（5.71） 94.29%*

對照組 40 22（55. 00） 8（20.00） 10（25.00） 75.00%

X2 8.218

P 0.352

注：*與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.3 2組患者復(fù)發(fā)率比較 所有患者均隨訪1年，其中，治療組復(fù)發(fā)5例（14.29%），對照組復(fù)發(fā)15例（37.50%）。兩組復(fù)發(fā)率差異有顯著性（P

3 討論

大量的研究和實驗已揭示：OFR的產(chǎn)生過多與潰瘍的復(fù)發(fā)有密切的關(guān)系。Naito et al[8]通過研究證實給予OFR清除劑治療能提高潰瘍愈合質(zhì)量。抗氧化劑治療消化性潰瘍，在文獻(xiàn)中有報道，但聯(lián)合抗氧化劑治療消化性潰瘍，探討癥狀緩解時間、潰瘍愈合時間、潰瘍復(fù)發(fā)率、療效與經(jīng)濟關(guān)系的綜合研究在國內(nèi)外罕有報道。尤其是潰瘍復(fù)發(fā)這一臨床難題尚未得到解決。通過PPI聯(lián)合抗氧化劑VitE治療消化性潰瘍，在隨機病例中開展對照臨床研究，探討癥狀緩解時間、潰瘍愈合時間、尤其是消化性潰瘍復(fù)發(fā)率問題，具有新穎性、可行性和實用性。

VitE是一種良好的天然脂溶性維生素，在體內(nèi)可保護易被氧化的物質(zhì)，減少過氧化脂質(zhì)的生成。新近有研究表明[9]，潰瘍病患者胃粘膜抵抗力差與脂肪過氧化作用紊亂有關(guān)。VitE可起調(diào)節(jié)脂肪氧化、清除氧化自由基的作用，而保護細(xì)胞不受氧化劑的損害。同時，大量的VitE又可促進(jìn)毛細(xì)血管和小血管增生[10]，并改善周圍血液循環(huán)，增加組織中氧的供應(yīng)，從而給潰瘍面愈合創(chuàng)造良好的營養(yǎng)條件。此外，尚可抑制Hp的生長，使?jié)儾∮虾蟮膹?fù)發(fā)率降低。本次研究中，治療組的癥狀緩解時間、潰瘍愈合時間及治療有效率均顯著優(yōu)于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均

除了VitE之外，目前臨床應(yīng)用的許多藥物都有抗氧化作用，如VitC、心血康、別嘌醇等。本次研究僅針對聯(lián)合VitE治療消化性潰瘍的效果進(jìn)行研究，而其他抗氧化劑在清除氧自由基提高消化性潰瘍治愈率及降低其復(fù)發(fā)率的臨床價值是今后需要進(jìn)一步研究探討的課題。此外，抗氧化劑降低消化性潰瘍的遠(yuǎn)期（3年、5年）復(fù)發(fā)率也是值得研究者深入思考的問題。

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