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【關鍵詞】甘草

甘草為豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch)、脹果甘草（glycyrrhizainflatabat）或光果甘草(glycyrrhizaglabral)的干燥根及根莖，始載于《本經(jīng)》，藥用歷史悠久。其功能補脾益氣、潤肺止咳、緩急止痛、清熱解毒、緩和藥性。主要含有甘草酸及甘草苷類成分，其中甘草酸為現(xiàn)代藥理應用研究證實具有抗纖維化、抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強免疫功能等作用［1］。目前針對甘草的內(nèi)在質(zhì)量控制，主要圍繞甘草酸成分進行定性、定量一類的檢查。2005版《中國藥典》收載了RP-HPLC三元等度洗脫法測定甘草酸的方法，規(guī)定甘草酸含量不得低于2%［2］。本實驗依托2005版《中國藥典》一部甘草酸含量測定（附錄VID）項下操作主線，采用RP-HPLC法測定甘草酸的含量，方法簡便、快速，重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定，用于甘草酸的檢測專屬性強，

1儀器與試劑

1.1儀器

Agilend1100系列液相色譜儀、四元泵、在線真空脫氣、DAD檢測器、化學工作站、1200型自動進樣器。

1.2試劑

甘草酸單銨鹽（monoam0niumglycyrrhitinate）對照品（中國藥品生物制品檢定所）；甘草(glycyrrhizainflatabat)樣品，產(chǎn)地新疆（華東醫(yī)藥股份有限公司）；甲醇（色譜純）、醋酸銨（分析純）、冰醋酸（分析純）、水（雙蒸水）。

2實驗方法與結(jié)果

2.1色譜條件

美國ZORBAXExundC18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）為固定相；甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67∶33∶1）為流動相；檢測波長250nm；流速1ml·min-1；柱溫為室溫。柱效以甘草酸計，理論塔板數(shù)不應低于2000。結(jié)果被測成分于7min內(nèi)即可出完，三元等度洗脫全程為0～20min。記錄的色譜圖結(jié)果見圖1，2。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取80℃干燥至恒重的甘草酸單銨鹽0.1g對照品，置100ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，使成每ml含有甘草酸單銨鹽1mg對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取甘草，研細（過3號篩），置烘箱內(nèi)80℃干燥至恒重，精密稱取0.3g，置100ml量瓶中，加流動相約45ml，超聲處理（功率250W，頻率20KH2）30min，取出，放冷，加流動相至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4測定方法

精密吸取對照品溶液及供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液色譜圖中甘草酸的峰面積（3次平均）外標法計算甘草中甘草酸的含量（%，W/W）。

2.5線性關系

精密吸取對照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml于100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10μl，記錄峰面積。以進樣量（μg）為橫坐標（X），峰面積(A)為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。甘草酸回歸方程為Y=3.00029X+1.23099r=0.99989，線性范圍0.1033～1.0330μg。

2.6精密度試驗

精密吸取供試品溶液與上述色譜條件下進樣10μl，重復5次，以被測成分峰面積分別計算，結(jié)果甘草酸RSD=1.21%。

2.7穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液10μl，分別于0、2、4，6、8h進樣，記錄峰面積，結(jié)果甘草酸RSD=1.45%。(n=5)。

2.8重現(xiàn)性試驗

取同一批次甘草藥材按2.3項下提取制備5份供試溶液，分別精密吸取10μl進樣，記錄峰面積，結(jié)果甘草酸RSD=1.32%。

2.9回收率測定

取已知含量的甘草樣品粉末約0.2g，精密稱定9份，置10ml的量瓶中，樣本中添加1mg/ml甘草酸對照品溶液1ml，按2.3項下操作，進樣10μl，依2.4法測定,記錄峰面積并計算回收率，甘草酸平均回收率為99.04%RSD=0.79%，結(jié)果見表1。表1甘草酸加樣回收率實驗結(jié)果（略）

2.10樣品測定

取6批樣品，按2.3項下提取制備，依2.4項方法測定，重復測定3次，結(jié)果生藥甘草的平均含量為7.85%RSD=0.85%。

3討論

3.1洗脫溶劑系統(tǒng)的選擇

本實驗為RP-HPLC三元等度洗脫法。選擇甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：33：1）作為洗脫溶劑，是基于甘草酸對三元等度洗脫系統(tǒng)的適應性的考量。脹果甘草中含有甘草酸、甘草苷等成分，因此只要選擇適宜的洗脫溶劑系統(tǒng)，以促使各組分的分配系數(shù)較大，達到基線分離的效果。實驗證明該方法簡單、易行，設備要求相較梯度洗脫為低，早期一類設備都可用于檢測，且抗干擾性強，具有專屬性特點。

3.2關于甘草酸

由生藥甘草中提取的甘草酸，通常稱之天然甘草酸，天然甘草酸存在順反異構(gòu)，且以順式甘草酸含量為高，反式甘草酸含量極低。本實驗未能揭示該異構(gòu)體基線分離，可能與該異構(gòu)體化學結(jié)構(gòu)相似抑或是脹果甘草本身未含有反式甘草酸有關，尚待進一步研究。

【參考文獻】

1張劍峰，張丹參.甘草酸藥理作用的研究進展.河北北方學院學報（醫(yī)學版），2005，22(4):82.

2國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）.北京：化學工業(yè)出版社，2005.60.