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【摘要】目的比較山茱萸不同炮制品中馬錢素含量。方法高效液相色譜法。結(jié)果各炮制品中的馬錢素含量相對于生品含量有所降低。結(jié)論不同的炮制方法對山茱萸中的馬錢素含量有明顯影響。

【關(guān)鍵詞】山茱萸；炮制；馬錢素；高效液相色譜法

TheComparisonoftheContentsofLoganininFructusCornibyDifferentProcesses

Keywords：FructusCorni;Process;Loganin;HPLC

山茱萸具有補(bǔ)益肝腎、澀經(jīng)固脫之功效，用于眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽痿遺精、遺尿、尿頻、崩漏帶下、大汗虛脫、內(nèi)熱消渴等癥，是成藥六味地黃丸、八味地黃丸等的重要原料。目前認(rèn)為山茱萸中所含的熊果酸、齊墩果酸、山茱萸苷、馬錢素、沒食子酸、莫諾苷等為其主要活性成分［1］，具有降低血糖、增強(qiáng)免疫、利尿、降壓、抗炎等藥理作用［2］。《中國藥典》2005版規(guī)定測定馬錢素含量作為山茱萸藥材質(zhì)量控制指標(biāo)［3］。山茱萸臨床和入中成藥多用其炮制品，并認(rèn)為山茱萸生用以斂陰止汗力強(qiáng)，蒸制后以補(bǔ)腎澀精，固精縮尿力勝，酒炙后借酒力溫通，助藥勢，降低其酸性，滋補(bǔ)作用強(qiáng)［4］。馬錢素作為山茱萸中水溶性有效成分之一，其結(jié)構(gòu)屬于環(huán)烯醚萜苷類成分，炮制加熱和加輔料對其含量肯定有一定影響，但目前尚未見到有關(guān)報(bào)道。本研究以馬錢素為考察指標(biāo)，比較不同炮制方法對其含量的影響，以期為制定山茱萸合理的炮制工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1器材

1.1儀器與試劑BS210S型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；高效液相色譜儀：LC-2010A(SHIMADZU)；檢測器SPD-M10A；工作站：Class－VP；H66025T超聲清洗機(jī)（無錫超聲電子設(shè)備廠）；101A-2型干燥箱（中華人民共和國上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；LDZX-40BI型立式自動電熱壓力蒸氣滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）。馬錢素對照品（由北京格潤得科技公司提供，純度在98%以上）；黃酒（河南濮陽亞光酒廠）；甲醇（天津四友生物有限公司）、乙腈(杭州百林)為色譜純；氯仿、無水乙醇等均為分析純。

1.2藥材由宛西制藥股份公司提供，產(chǎn)于河南西峽縣山茱萸GAP種植基地，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)科陳隨清教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSiet.etZncc.的干燥成熟果肉。

2方法

2.1樣品制備根椐《中國藥典》凈制要求，取山茱萸樣品，除去雜質(zhì)和殘留的果梗和核，即為凈山茱萸，再按不同炮制方法的要求炮制成為以下實(shí)驗(yàn)樣品。

2.1.1生品取山茱萸樣品，除去雜質(zhì)和殘留的果梗和核，放置備用。

2.1.2加壓酒蒸品取凈山茱萸100g，緩慢加入40ml黃酒攪拌均勻，加蓋密閉悶潤20min后將樣品放入壓力鍋中蒸制，待溫度升至115℃后，保持該溫度1h，取出攤于瓷盤中，于烘箱中80℃烘3h至干，取出，置干燥器中放涼備用。

2.1.3酒蒸品取凈山茱萸100g，緩慢加入40ml黃酒攪拌均勻，加蓋悶潤40min，置于濾布上攤開，放在蒸籠上蒸3h后，于烘箱中80℃烘3h至干，取出，置干燥器中放涼備用。

2.1.4酒燉品取凈山茱萸100g，緩慢加入20ml黃酒攪拌均勻,加蓋悶潤60min，置不銹鋼鍋中，隔水燉3h，攤于瓷盤中，于烘箱中80℃烘3h至干，取出，置干燥器中放涼備用。

2.1.5清蒸品取凈山茱萸100g，置于濾布上攤開，放在蒸籠上蒸3h后，取出攤于瓷盤中，于烘箱中80℃烘3h至干，取出，放于干燥器中放涼備用。

2.2山茱萸不同炮制品中水分含量比較按照《中國藥典》規(guī)定方法［3］分別稱取山茱萸炮制品粗粉3g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，精密稱定，打開瓶蓋，在105℃干燥5h，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，冷卻30min，精密稱定重量，再在上述溫度干燥1h，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算山茱萸不同炮制品中水分的含量。結(jié)果見表1。表1山茱萸不同炮制品中水分的含量結(jié)果（略）

從山茱萸不同炮制品中水分含量可以看出，所有炮制品中含水量都在7%～13%以內(nèi)，符合《中國藥典》規(guī)定。此外，實(shí)驗(yàn)中所有炮制樣品中的馬錢素含量都按干燥品計(jì)算。

2.3HPLC法測定馬錢素含量

2.3.1色譜條件色譜柱為ODS柱4.6mm×250mm(大連依利特)；乙腈-水（15∶85）為流動相；檢測波長240nm；柱溫25℃；流速1ml/min；分析時(shí)間20min。

2.3.2對照品溶液的制備精密稱取馬錢素對照品0.46mg置2ml容量瓶中，加甲醇(色譜純)使溶解并定容至刻度，搖勻，微孔濾膜過濾（0.45μm）,即得濃度為0.23mg·ml-1馬錢素對照品溶液。

2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制依次自動進(jìn)樣馬錢素對照品溶液1，3，5，7，9μl于高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測定,并對結(jié)果進(jìn)行分析。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對照品含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：Y=1274329.13X-17626.1，r=0.9999。結(jié)果表明在0.23～1.15μg范圍線性關(guān)系良好。見表2和圖1。表2山茱萸馬錢素標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)（略）

2.3.4精密度實(shí)驗(yàn)連續(xù)自動進(jìn)樣馬錢素對照品溶液5μl，按前述條件測定峰面積積分值，計(jì)算RSD值，結(jié)果表明精密度良好RSD=0.097%。結(jié)果見表3。表3精密度考察結(jié)果（略）

2.3.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)分別在0，2，4，6，8，10h自動進(jìn)樣馬錢素對照品溶液5μl，照前述色譜條件測定峰面積積分值計(jì)算RSD值，結(jié)果表明馬錢素在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好,RSD=0.15％。結(jié)果見表4。表4穩(wěn)定性考察結(jié)果（略）

2.3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)稱取山茱萸同一樣品粗粉5份各約1g，精密稱定，按照供試品溶液制備方法和色譜條件，制備供試品溶液并注入高效液相儀，計(jì)算含量，RSD=1.63％。結(jié)果見表5。表5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

2.3.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知馬錢素含量的山茱萸粉末約0.5g，精密稱定，共5份，分別加入馬錢素對照品，以下按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，得到5份加樣回收供試液。自動進(jìn)樣各加樣供試液10μl，測定，用外標(biāo)法根據(jù)峰面積積分值進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果見表6。表6加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

每份加入對照品4.040mg，樣品含量8.0810mg·g-1。

2.3.8供試品溶液的制備各取樣品粗粉約1g，精密稱定，置具塞三角瓶中，加入30%甲醇10ml，超聲提取15min，傾出上清液抽濾，重復(fù)上述操作4次，用適量30﹪甲醇清洗殘?jiān)?合并濾液，定容至50ml容量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.9樣品含量測定取各供試品溶液分別自動進(jìn)樣5μl，測定馬錢素峰面積積分值，計(jì)算樣品含量。對照品和樣品色譜圖見圖2～4。結(jié)果見表7。表7不同炮制品中的馬錢素含量（略）

熊果酸含量和馬錢素含量均是以干燥品計(jì)，且是兩次測定的平均值

從表7可知，馬錢素含量相對于生品含量均有所降低，由高到低依次為生品>酒燉品>加壓酒蒸品>酒蒸品>清蒸品。

3討論

3.1山茱萸由于藥用歷史悠久，炮制方法較多，本實(shí)驗(yàn)所采取的是臨床常用的炮制方法，加壓酒蒸、清蒸、酒燉、酒蒸等炮制工藝中的加酒量、悶潤時(shí)間、炮制時(shí)間，均經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選確定。由于實(shí)驗(yàn)內(nèi)容較多，篇幅所限，正交實(shí)驗(yàn)的研究過程沒有報(bào)道。

3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同炮制方法和加入的輔料對馬錢素含量有一定影響，其炮制品中馬錢素含量相對于生品均有所降低，且以清蒸品含量最低。馬錢素含量降低的原因可能是馬錢素屬于環(huán)烯醚萜苷類，在一定條件下易發(fā)生水解，炮制加熱和加入輔料對其能產(chǎn)生一定影響的緣故。

3.3據(jù)藥理作用研究表明，山茱萸具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗休克、降糖、強(qiáng)心作用，其不同成分具有不同的免疫藥理活性［4］。其中熊果酸體外具有一定的促進(jìn)免疫效應(yīng)，并有抑菌、安定、降溫和抗糖尿病等作用［1］；馬錢素在低濃度(0.016mg/ml)時(shí)有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用而高濃度(0.500mg/ml)時(shí)則有抑制作用,提示馬錢素對免疫反應(yīng)有雙向調(diào)節(jié)作用［5］。本研究以馬錢素作為山茱萸不同樣品的考察指標(biāo)，正是以其藥理作用為依據(jù)的，山茱萸炮制前后馬錢素含量的變化，對其藥理作用肯定有影響，其具體量效關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

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