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【摘要】目的以綠原酸含量為指標，比較不同產地加工的金銀花品質。方法采用高效液相色譜法，使用DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）為流動相；檢測波長為327nm；柱溫30℃；流速1.0ml/min。結果蒸制后干燥的產地加工法優(yōu)于直接干燥的加工方法。結論不同產地加工方法的金銀花中綠原酸含量有較大差異。

【關鍵詞】金銀花；綠原酸；產地加工；高效液相色譜法

ComparisonontheChlorogenicAcidContentinFlosLoniceraeProcessedinDifferentProducingAreas

Abstract：ObjectiveTocomparethequalityofFlosLoniceraeprocessedindifferentproducingareas.MethodsThecontentofchlorogenicacidinFlosLoniceraewasdeterminedbyHPLC.DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm)wasusedandthemobilephasewasAcetonitrile-0.4%Phosphoricacid(15∶85).Thewavelengthofdetectorwas327nm,thecolumntemperaturewas30℃andtheflowratewas1.0ml/min.ResultsSteamingandovendryingwerebetterthandirectdrying.ConclusionThecontentofchlorogenicacidisdifferentintheFlosLoniceraeprocessedbydifferentprocessinginproducingareas.

Keywords：FlosLonicerae;Chlorogenicacid;Processinginproducingareas;HPLC

金銀花具有廣泛的藥用價值，可以清熱解毒、涼血化淤，主治外感風熱、瘟病初起、瘡瘍疔毒、紅腫熱痛、便膿血、增強免疫功能等。金銀花的常見藥用制品有銀翹解毒丸、梔子金花丸、銀翹解毒片、銀翹散、五味消毒飲、祛感靈膠囊、咽炎沖劑、外陰洗劑等［1，2］，另外金銀花也能夠起到防風固沙、保持水土、改良土壤、改善生態(tài)、綠化環(huán)境的多重效用。金銀花其藥用價值主要由其所含化學成分來體現(xiàn)。通過研究得知，金銀花化學成分復雜，已鑒別出的就有60多種，其中具有生物活性，并已搞清楚結構的化合物主要有：綠原酸、異綠原酸、黃酮類的木犀草素和揮發(fā)油類的芳樟醇等［3～5］。

中藥的使用注重產地加工及炮制，不同的加工炮制方法對中藥的使用有著不同的意義。而金銀花在《中國藥典》2000年版Ⅰ部及《浙江省中藥炮制規(guī)范1994年版》中均未提及產地加工中應蒸制后再干燥［1，2］，翻閱以往文獻也未有所獲；但在民間采收過程中常有蒸制后再干燥的加工習慣。由于在金銀花各化學成分中綠原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抗肝炎等特殊作用，因此普遍把綠原酸含量的高低作為衡量金銀花質量的標準［5］。本論文的主要內容就是以金銀花中綠原酸的含量為指標，以HPLC法為手段，比較兩種不同產地加工的金銀花的品質。

1材料

1.1儀器Waters510色譜系統(tǒng)，490E紫外檢測器。HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+（杭州英譜科技開發(fā)有限公司）。

1.2試藥對照品：綠原酸（chlorogenicacid）購自中國藥品生物制品檢定所，批號為753-200111；高純水，其他試劑均為色譜純。

1.3樣品取自金華瑯琊，經鑒定為忍冬科植物金銀花LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾或帶初開的花。1號樣品采收后直接干燥，2號樣品采收后經蒸制再干燥。

2方法與結果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗色譜柱為DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85），流速1.0ml·min-1，檢測波長327nm，柱溫30℃，AUFS0.3；進樣量20μl；理論板數(shù)按綠原酸峰計算不低于5000。

2.2供試品溶液的制備分別取1號和2號樣品研成細粉，精密稱取細粉各約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得。

2.3對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品0.0106g，置棕色容量瓶中加50%甲醇溶解并稀釋至50.0ml，即為對照品溶液。

2.4線性關系考察精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，按上述色譜條件測定綠原酸的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝2.19×108X－1.52×105，r=0.9996，綠原酸進樣濃度在21.20～106.0μg·ml-1內峰面積積分值與濃度呈線性關系。

2.5進樣精密度實驗精密吸取對照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，作為對照液，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，RSD=0.71%。

2.6穩(wěn)定性實驗精密吸取2．4項下對照液，每隔1h進樣1次，測定綠原酸峰面積積分值，RSD=0.77%，結果表明在5h內穩(wěn)定性較好。

2.7加樣回收實驗分別取樣品適量，精密加入對照品溶液2.0ml(0.212mg·ml-1)，按2．2項下方法制備供試品溶液，測定并計算回收率。結果見表1。

表1樣品中綠原酸回收率測定結果（略）

2.8樣品測定分別精密吸取2．2項下對照液與1號和2號供試品溶液各20μl分別進樣測定。用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。結果見圖1及表2。

A.對照品B.藥材a.綠原酸

圖1藥材和對照品的HPLC（略）

表2不同產地加工金銀花中綠原酸的含量測定結果（略）

3討論

綠原酸的50%甲醇溶液應避光陰涼處保存，否則峰面積會有所改變而影響測定的準確性。

從表2可見，不同產地加工成的金銀花樣品中綠原酸含量差別較大，產地加工中經蒸制后再干燥的樣品含量要比直接干燥的樣品高出5倍多。建議產地加工方法寫入標準中，以確保綠原酸的含量。

通過對不同產地加工的金銀花中綠原酸的含量測定的比較，未經蒸制直接干燥的金銀花中綠原酸含量僅為1.0%，而蒸后干燥的則有5.7%，就綠原酸的含量來說，蒸制后干燥的產地加工方法優(yōu)于直接干燥的加工方法。

本課題還需對不同產地加工的金銀花進行指紋圖譜研究、譜效關系的研究等，進一步從更全面的角度說明產地加工的優(yōu)劣。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2000：177.

［2］浙江省衛(wèi)生廳.浙江省中藥炮制規(guī)范［S］.杭州：浙江省科技出版社，1994：278.

［3］徐炳聲.中藥金銀花原植物研究［J］.藥學學報，1979，14(1)：23.

［4］徐國鈞，徐珞珊，牛燕珍，等.中藥金銀花的鑒定研究Ⅰ［J］.南京藥學院學報，1979，(1)：82.

［5］柯銘清.中草藥有效成分理化與藥理特性［M］.長沙：湖南省科技出版社，1982：225