導(dǎo)語：黃連生物堿的抑菌作用分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1器材

實(shí)驗(yàn)藥物：小檗堿、藥根堿、黃連堿和巴馬亭（由實(shí)驗(yàn)室從石柱黃連中提取分離制備，HPLC檢測(cè)純度均在97%以上）。實(shí)驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，金黃色葡萄球菌耐藥菌（MR），膿腫分枝桿菌，傷寒桿菌，綠膿桿菌，志賀氏痢疾桿菌，克雷伯氏菌，腸炎沙門菌，巨大芽孢桿菌，枯草桿菌，大腸桿菌變形桿菌，白色葡萄球菌，假絲酵母，白色念珠菌，四聯(lián)球菌，魚害粘球菌和魚腸型點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌（實(shí)驗(yàn)菌株由重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原微生物教研室和西南大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院微生物教研室提供）。

培養(yǎng)基：真菌采用改良沙保氏培養(yǎng)基（配方為：蛋白胨10g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml），魚病原菌（鮭腎桿菌，魚害粘球菌和魚腸型點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌）采用胰蛋白胨醋酸鈉培養(yǎng)基（配方：胰蛋白胨5.0g，醋酸鈉2.0g，酵母膏5.0g，牛肉膏0.2g，蒸餾水1000ml），其它細(xì)菌采用普通細(xì)菌培養(yǎng)基加減成分進(jìn)行培養(yǎng)。配制時(shí)固體培養(yǎng)基加入1.5%的瓊脂，液體培養(yǎng)基不加。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：96微孔板，酶標(biāo)儀，超凈工作臺(tái)，滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱。

2方法

2.1微生物敏感性實(shí)驗(yàn)將備選的菌種采用較高濃度的藥液進(jìn)行藥物敏感實(shí)驗(yàn)，初步確定3種生物堿對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的抑菌作用，為進(jìn)一步研究藥物對(duì)敏感菌的抑菌能力提供依據(jù)。

方法為：①藥液配制及紙片制備：將每種藥液均配制成濃度為2.0mg/ml的溶液，將直徑6.35mm的紙片浸泡于藥液，100℃/30min滅菌，冷卻后置冰箱保存。②菌液制備：將實(shí)驗(yàn)菌種先接種到斜面活化培養(yǎng)24h,膿腫分枝桿菌培養(yǎng)2d后用滅菌生理鹽水洗下，計(jì)數(shù)后用液體培養(yǎng)基配成108cfu/ml的菌液。③抑菌圈試驗(yàn)：用滅菌后的涂布環(huán)將試驗(yàn)菌液均勻涂抹于固體瓊脂平板上，每個(gè)平板放上3個(gè)藥物紙片，膿腫分枝桿菌培養(yǎng)2d，其它實(shí)驗(yàn)菌培養(yǎng)24h后觀察，記錄抑菌環(huán)直經(jīng)。

2.2敏感菌的MIC定量實(shí)驗(yàn)對(duì)3種藥液進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)以后，挑選敏感的菌種，采用液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法培養(yǎng)后檢測(cè)每種黃連生物堿對(duì)敏感菌的最小抑菌濃度（MIC）。

1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512和1∶1024共11個(gè)濃度。②實(shí)驗(yàn)操作在96微孔板上進(jìn)行，每試驗(yàn)微孔用移液槍加入液體培養(yǎng)基100μl，試驗(yàn)菌液20μl，藥液120μl，混勻后置37℃培養(yǎng)，膿腫分枝桿菌培養(yǎng)2d，其它實(shí)驗(yàn)菌培養(yǎng)24h后觀察。每個(gè)實(shí)驗(yàn)3個(gè)重復(fù)并設(shè)立不加實(shí)驗(yàn)菌的本底對(duì)照（120μl藥液＋120μl液體培養(yǎng)基）。③采用酶標(biāo)儀檢測(cè)微孔板實(shí)驗(yàn)菌的生長(zhǎng)情況，檢測(cè)指標(biāo)為微孔中培養(yǎng)液體系的光密度（OD值），檢測(cè)波長(zhǎng)620nm。實(shí)驗(yàn)微孔的OD值減去同濃度的本底對(duì)照的OD值即為實(shí)驗(yàn)微孔的OD凈值。根據(jù)OD凈值判定藥物對(duì)該實(shí)驗(yàn)菌的MIC。

3結(jié)果與討論

3.1藥物敏感性實(shí)驗(yàn)表1為黃連中4種生物堿對(duì)常見19種微生物藥物敏感性試驗(yàn)的觀察結(jié)果，從表中可以看出，4種黃連生物堿的敏感菌菌譜除了藥根堿以外其它3種基本相同，從表中數(shù)據(jù)不難發(fā)現(xiàn)，黃連生物堿類對(duì)G+菌比對(duì)G－菌和真菌的作用更加明顯。表1黃連生物堿對(duì)19種病原菌的藥敏實(shí)驗(yàn)（略）

3.2黃連生物堿敏感菌的MIC測(cè)定表2為4種黃連生物堿在2000μg/ml濃度紙片法條件下篩選出的14種敏感菌的MIC測(cè)定結(jié)果，從表中數(shù)據(jù)可知：4種生物堿對(duì)同種敏感菌的抑菌能力有一定的差異，總體分析來看，小檗堿的抑菌作用和抑菌譜似乎更大一些，黃連堿和巴馬亭次之，藥根堿最弱。由于藥物的難溶性而限制進(jìn)一步提高藥物濃度，在表面看來是抑菌譜的差異實(shí)際上可能是抑菌能力的差異。同時(shí)在試驗(yàn)中還觀察到4種生物堿對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用，小檗堿，黃連堿和巴馬亭對(duì)膿腫分枝桿菌具有一定的抑制作用。表24種黃連生物堿對(duì)敏感菌的MICμg·ml-1（略）

小檗堿，黃連堿，巴馬亭和藥根堿是黃連中含量最為豐富的4種生物堿，4種生物堿具有相同的基本分子骨架即原小檗堿類生物堿分子骨架和芳型季銨氮結(jié)構(gòu)，4種生物堿均具有相同的異喹啉基本分子骨架，抑菌譜理論上不會(huì)產(chǎn)生較大差異。而Iwasa等［2］報(bào)道原小檗堿類生物堿的藥效必需結(jié)構(gòu)為7位的芳環(huán)季銨氮結(jié)構(gòu)，4種生物堿在分子結(jié)構(gòu)上的區(qū)別在于A環(huán)2，3位取代基團(tuán)和D環(huán)9，10位的取代基團(tuán)的不同，而在A環(huán)和D環(huán)取代基團(tuán)不同對(duì)原小檗堿類化合物的抑菌活性會(huì)有增減作用。

張傳美等［3］發(fā)現(xiàn)黃連復(fù)方三黃湯或黃連小檗堿對(duì)慶大霉素大腸桿菌具有很好的抑制活性，認(rèn)為它們能抑制和消除耐藥菌株的抗藥性。本實(shí)驗(yàn)中4種黃連生物堿對(duì)金葡菌和耐藥金葡菌（MR）的MIC基本相同，進(jìn)一步證明了黃連生物堿對(duì)耐藥菌株有較好的抑制作用，就此現(xiàn)象進(jìn)行研究具有很高的醫(yī)學(xué)價(jià)值。

對(duì)原小檗堿類化合物藥理作用的深入研究后發(fā)現(xiàn)，該類化合物除了具有較強(qiáng)的抗菌消炎作用外，而且還具有降血脂，降血糖，抗腫瘤和抗瘧疾等藥理作用［3～5］。因此，對(duì)原小檗堿類生物堿藥物化學(xué)的深入研究具有較高的科研價(jià)值。

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【摘要】目的小檗堿，藥根堿，黃連堿和巴馬亭是黃連中4種主要的生物堿，為深入研究4種黃連生物堿成分的抑菌特性差異，本實(shí)驗(yàn)對(duì)它們的抑菌譜和抑菌活性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。方法以從石柱黃連中提取的4種生物堿為實(shí)驗(yàn)藥物，采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)法，在2000μg/mL藥液濃度下對(duì)常見的19種微生物進(jìn)行了藥物敏感性試驗(yàn),并通過比濁法對(duì)敏感菌的最小抑菌濃度（MIC）進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果4種生物堿成分的敏感菌范圍相同但抑菌活性不同，其中小檗堿的抑菌活性最大,黃連堿和巴馬亭次之，藥根堿最小；4種黃連生物堿對(duì)革蘭氏陽性菌的抑制活性大于革蘭氏陰性菌和酵母菌；每種生物堿對(duì)耐藥金葡菌（MR）和金葡菌的抑菌能力基本相同。結(jié)論4種黃連生物堿均為黃連的抗菌活性成分，抑菌譜相同，但抑菌活性有較大差異；4種黃連生物堿對(duì)耐藥金葡菌的耐藥性具有消除作用。

【關(guān)鍵詞】黃連小檗堿藥根堿巴馬亭黃連堿抑菌