導(dǎo)語：苜蓿總黃酮分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1器材

1.1原料現(xiàn)蕾期紫花苜蓿〔品種為WL323〕采自于河北省保定市河北農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗基地。將苜蓿洗凈，40℃下烘干，用粉碎機在40目下粉碎成粉末。

1.2試劑與儀器乙醇、石油醚、蘆丁、實驗用水為去離子水。VIS-7220型紫外分光光度計，F(xiàn)2102微型植物粉碎機，SHB-IIIA循環(huán)水式多用真空泵，KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器，756PC型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司），索氏提取器等。

2方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確配置100ml濃度為0.168mg/ml的蘆丁儲備液。準(zhǔn)確吸取蘆丁儲備液0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml放入7個25ml的容量瓶中，用30%的乙醇定容到刻度，在266nm下測定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為Y=0.18222×C+0.05853（C:mg/ml），線性相關(guān)系數(shù)r=0.9988。

2.2單因素及正交實驗設(shè)計見表1。表1正交實驗因素水平

3結(jié)果

3.1單因素實驗結(jié)果與分析

3.1.1乙醇濃度的確定稱取1g苜蓿粉末3份，分別加入20ml的60%，70%，80%的乙醇，加熱回流提取2h，溶液冷卻后離心5min，再取0.5ml稀釋到10ml在266nm下測吸光度。測定吸光度分別為0.220，0.444，0.421。

隨乙醇濃度的增加，吸光度亦隨之增大。當(dāng)濃度達到70%時，黃酮類化合物溶解度最大，吸光度最高。乙醇濃度再增加，黃酮類化合物溶解度減小，同時一些醇溶性雜質(zhì)、色素、親脂性強的成分溶出量增加，這些成分與黃酮類化合物競爭同乙醇-水分子結(jié)合，從而導(dǎo)致黃酮化合物提取率下降。因此確定乙醇濃度為70%。

3.1.2提取方法的確定稱取1g苜蓿粉末3份，分別加入20ml70%的乙醇，分別用加熱回流萃取、索氏提取器提取、超聲萃取的方法提取2h，然后取部分溶液離心5min，再取0.5ml稀釋到10ml測吸光度。測定吸光度為0.443，0.499，0.538，因此確定提取方法為超聲提取法。

3.1.3提取時間的確定稱取1g苜蓿粉末5份，分別加入20ml70%的乙醇，用超聲萃取的方法分別提取0.5，1，1.5，2，2.5h，然后取部分溶液離心5min，再取0.5ml稀釋到10ml測吸光度。測定結(jié)果為0.321，0.385，0.531，0.527，0.520。可以確定提取時間為1.5h。

3.1.4料液比的確定稱取1g苜蓿粉末4份，按1∶10，1∶20，1∶30，1∶40（g/ml）的料液比加入70%的乙醇，用超聲提取的方法提取1.5h，然后取部分溶液離心5min，再取0.5ml稀釋到10ml測吸光度。測定結(jié)果0.512，0.537，0.602，0.497?？梢源_定料液比為1∶30（g/ml）。

3.1.5提取次數(shù)的確定稱取1g苜蓿粉末4份，分別加入70%的乙醇，用超聲提取法分別提取1，2，3，4次，1.5h/次，然后取部分溶液離心5min，再取0.5ml稀釋到10ml，測吸光度。測定結(jié)果0.525，0.545，0539，0.521?？梢源_定提取次數(shù)為兩次。

3.2正交實驗結(jié)果與分析在單因素實驗基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交實驗對提取工藝條件進一步優(yōu)化。結(jié)果見表2～3。

由表2和表3知，在超聲提取下，各因素對提取結(jié)果的影響大小依次為B>A>C>D，其中影響因素A、B表現(xiàn)為極顯著，因素C表現(xiàn)為顯著，因素D對結(jié)果的影響不顯著，從節(jié)省原料的角度考慮選擇60%的乙醇。所以最佳組合為A3B2C1D1。表2正交實驗設(shè)計及結(jié)果表3方差分析

3.3苜蓿中黃酮的測定準(zhǔn)確稱取1.00g苜蓿粉末，加入30ml60%乙醇，用超聲法提取3次，1h/次。合并提取液定容到250ml。取1ml樣液，放入25ml容量瓶中，用30%的乙醇稀釋至刻度，試劑為空白參比。根據(jù)測得吸光度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中總黃酮含量為3.81%，3.75%，3.69%。

4結(jié)論

經(jīng)正交實驗，確定了超聲法提取苜蓿總黃酮的最佳工藝為：60%乙醇，30∶1的液固比，提取3次，1h/次。測量結(jié)果表明苜蓿全草中含有總黃酮3.75%，苜蓿葉子中含有總黃酮4.85%。

【參考文獻】

［1］宋立人,洪恂,丁緒亮,等.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典,上冊［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:1236.

［2］張東杰,夏美茹.苜蓿的營養(yǎng)功能及在功能食品中的應(yīng)用［J］.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報,2002,14（4）:69.

［3］何云,劉圈煒,王成章.紫花苜?；钚猿煞盅芯窟M展［J］.飼料工業(yè),2005,26（17）:52.

［4］白鳳梅,蔡同一.類黃酮生物活性及其機理的研究進展［J］.食品科學(xué),1999,8:11.

［5］曹緯國,劉志勤,邵云.黃酮類化合物藥理作用研究進展［J］.西北植物學(xué)報,2003,23（12）:2241.

［6］霍丹群,張文,李奇琳,等.超聲波法與熱提取法提取山楂總黃酮的比較研究［J］.中成藥,2004,26(12):1063.

［7］姜廷福,師彥平.天然產(chǎn)物黃酮類化合物的高效液相色譜分析［J］.分析測試技術(shù)與儀器,2002,8(4):199.

［8］曾紅燕,周樸華,侯團章.紅車軸草有效成分的研究進展［J］.中草藥,2001,32(2):189.

［9］邊清泉,楊振萍,馬美仲,等.紅車軸草提取物中異黃酮的定量方法的研究［J］.中國中藥雜志,2003,28(11):1044.

［10］陳寒青,金征宇,陶冠軍,等.紅車軸草不同部位中異黃酮含量的測定［J］.食品科學(xué),2004,25(6):150.

［11］陳寒青,金征宇.紅車軸草異黃酮提取工藝的研究［J］.食品科學(xué),2005,26(4):156.

【摘要】目的檢測苜蓿中總黃酮的含量，并研究其提取工藝。方法通過加熱回流、索氏提取、超聲提取3種工藝比較，確定采用超聲提取。以總黃酮含量為考察指標(biāo)，采用正交實驗法優(yōu)化超聲提取的工藝條件。結(jié)果所考察因素中，苜蓿的提取工藝各因素影響程度為：料液比＞提取次數(shù)＞提取時間＞乙醇濃度，最佳水平搭配為A3B2C1D1。結(jié)論苜蓿總黃酮最佳提取工藝參數(shù)為：超聲法提取，60%乙醇，30∶1的液固比，提取3次，1h/次。苜蓿全草中含有總黃酮3.75%，苜蓿葉子中含有總黃酮4.85%。

【關(guān)鍵詞】苜蓿；總黃酮；正交實驗