導(dǎo)語：冬蟲夏草二級接種分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1材料和方法

1.1材料

在做二級接種實(shí)驗(yàn)時(shí)所用的材料：冬蟲夏草(Cordycepssinensissacc)一級種是由2005年5月從西藏采來的冬蟲夏草子實(shí)體經(jīng)無菌分離培養(yǎng)所得。根據(jù)多次試驗(yàn)培養(yǎng)基成分結(jié)論如下：葡萄糖10g、磷酸氫二鉀1g、蛋白胨7g、維生素B2兩片、七水硫酸鎂0.3g、水1000ml、650ml大米。

1.2方法

藥品的稱量：對于一克以下的用精確的天平稱量。在稱量過程中，先調(diào)節(jié)天平所在的平面平衡以及天平平衡，并在左盤中放張濾紙后也要平衡。然后，制定規(guī)格，用藥匙向左盤中放入所要稱取得藥品直到平衡。但要注意先把天平放下來，再取盤中的藥品。

大于等于一克的物品用托盤天平量取即可。首先調(diào)節(jié)托盤天平平衡，在這一過程中，要注意先把游碼調(diào)到零點(diǎn)，調(diào)平后按左物右碼的規(guī)則。移動游碼直到所需的規(guī)格，然后，用藥匙向左盤中放藥品直到平衡，則左盤中的藥品即為所稱量的。

用量筒量取1000ml的水和650ml的大米。

在進(jìn)行二級種培養(yǎng)基制作過程中，我們運(yùn)用了一個(gè)方案

將量好的葡萄糖、磷酸氫二鉀、蛋白胨，維生素B2、七水硫酸鎂，同時(shí)溶解在1000ml水中，用玻璃棒攪拌使溶質(zhì)完全溶解。設(shè)總體積為v，稱取0.65v大米約650ml的大米，并用自來水沖洗一遍。把沖洗干凈的大米和所配制的溶液放入蒸壓鍋內(nèi)，蒸成熟米飯，然后冷直室溫，再平均裝到十個(gè)接種瓶（本試驗(yàn)用的是白色耐高溫高壓的罐頭瓶）內(nèi)。在裝的過程中必須使米飯疏松平齊，然后用細(xì)繩和單層塑料袋扎上瓶口。完成后再滅菌。

滅菌過程如下：把接種瓶放到滅菌筐中，在滅菌筐放進(jìn)高壓滅菌鍋前先檢查高壓滅菌鍋內(nèi)是否有足夠的水，檢查標(biāo)準(zhǔn)是看鍋底部中央有一個(gè)圓孔，當(dāng)水面高于或等于圓孔面時(shí)就可以。再打開電源，然后按設(shè)置按鈕，通過上下鍵來調(diào)節(jié)溫度、時(shí)間，即125攝氏度、30分鐘。最后按液相按鈕。此時(shí)也可以設(shè)定一個(gè)保溫溫度。滅菌后切斷電源，通過紅外感應(yīng)打開蓋[開蓋時(shí)身體側(cè)向一旁，因?yàn)殚_蓋會有大量熱氣冒出以免燙傷]小心地把接種瓶擺放在桌面上冷直二十四小時(shí)。

二級接種是指將試管[一級]內(nèi)的冬蟲夏草菌絲接到空間相對較大的接種瓶內(nèi)，從而有利于冬蟲夏草子實(shí)體的長出。

接種步驟：

接種前，需將凈化工作臺提前打開二十分鐘，一便工作臺內(nèi)的空氣是純凈的，同時(shí)也節(jié)省時(shí)間，提高工作效率。在凈化工作臺上做實(shí)驗(yàn)時(shí)，需將凈化工作臺的每一個(gè)面都要有用酒精棉徹底擦干凈，臺上的任何物品也要徹底擦干凈。接種時(shí)，手也要用酒精棉擦干凈，還要帶口罩。接種所用的任何儀器如接種鏟也要擦干凈。接種時(shí)，把接種瓶打開試管口不能碰到接種瓶口，而且不能在接種瓶口的上方，用接種鏟把試管內(nèi)的三分之一或四分之一的菌絲快速地放到接種瓶內(nèi)，并且要使菌絲與大米接觸（生長菌絲的面與大米接觸]提高菌絲擴(kuò)展速度。接種時(shí)要快速低污染地工作，接種過程中接種鏟不要碰到任何面。接種完畢后，在凈化工作臺上把接種瓶封閉好，然后關(guān)掉凈化工作臺，在寫標(biāo)簽[內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)名冬蟲夏草二級種、作者、日期）。整理凈化工作臺，打掃地面，刷洗試管，把洗凈的試管口向下放在斜面上涼干。把接種瓶放在黑暗室溫下培養(yǎng)。培養(yǎng)兩個(gè)月時(shí)，把接種瓶平均分成三組，編號為a、b、c。在實(shí)驗(yàn)臺上向a組加細(xì)沙子，向b組加大沙子，向c組不加任何東西。

a、b、c組的接種瓶放在黑暗室溫下培養(yǎng)。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

這種方法取得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

培養(yǎng)三天時(shí)，接種瓶內(nèi)有少量的白色菌絲長出，但有些接種瓶內(nèi)出現(xiàn)青色被青霉菌污染，還有的變黑、紅等，出現(xiàn)這種現(xiàn)象說明此接種瓶已經(jīng)被污染，需要及時(shí)清洗干凈，一防止其他接種瓶的污染。（清洗污染接種瓶，帶上口罩用小鏟把里面的大米全部挖出來放到垃圾袋內(nèi)，把接種瓶放到水盆里加些洗調(diào)劑，用刷子刷，然后再沖洗一遍，倒立在桌面涼干。）

幾天后有大量白色菌絲長出，同時(shí)也有的變紅色、黑色、青色等被青霉菌等所污染，同樣也要把污染的接種瓶清洗干凈，被污染的接種瓶清洗方法如上。

十五天，有大量白色菌絲往下延伸，逐漸長滿整個(gè)接種瓶。此時(shí)也有少量接種瓶被污染，也同樣的把污染的接種瓶清洗掉。

一個(gè)月，白色菌絲長滿接種瓶，有時(shí)也會發(fā)現(xiàn)接種瓶內(nèi)有水珠，則為菌絲呼吸作用的結(jié)果。菌絲也延伸到接種瓶的底部。菌落成各種形態(tài)，高低不平，出現(xiàn)高峰和低谷。這時(shí)有污染的接種瓶則不用清洗掉，因?yàn)榇藭r(shí)接種瓶內(nèi)的冬蟲夏草菌絲占優(yōu)勢對其他菌的抵抗力增強(qiáng)。

兩個(gè)月，白色菌絲長滿接種瓶，發(fā)現(xiàn)接種瓶內(nèi)有水珠。

3討論

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，造成污染的主要原因是由主觀造成的。由于自身的操作能力不夠或者是在操作中忽視了會造成二級種污染的外來物質(zhì)。因此在以后要多動手，提高操作能力。同時(shí)也要避免外來物質(zhì)的侵入。通過查找文獻(xiàn)，我們了解到了溫度、濕度、光照、空氣對冬蟲夏草子實(shí)體長出的影響。過高或過低的溫度造成冬蟲夏草菌絲的死亡；培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)不要太干燥否則不利于子實(shí)體的長出；培養(yǎng)冬蟲夏草時(shí)應(yīng)避光置于黑暗下培養(yǎng)；在培養(yǎng)后期應(yīng)該向接種瓶內(nèi)充氧氣，這樣有利于冬蟲夏草子實(shí)體的長出。

人工培養(yǎng)冬蟲夏草成功后，要擴(kuò)大培養(yǎng)，供給人們的需求。同時(shí)降低了冬蟲夏草的價(jià)格，使貧困的人也能買冬蟲夏草。人工培養(yǎng)出冬蟲夏草避免了冬蟲夏草的滅絕，有利于資源的多樣性。人工培養(yǎng)出冬蟲夏草會推動醫(yī)學(xué)的發(fā)展，會生產(chǎn)出各種各樣的藥品和保健品，給社會帶來了財(cái)富，給人們帶來了健康。

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論文關(guān)鍵詞：冬蟲夏草；二級接種；人工培養(yǎng)；接種瓶

論文摘要：冬蟲夏草（Cordycepssinensissacc）具有很大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但目前天然冬蟲夏草逐漸減少。現(xiàn)在人們開始了人工培養(yǎng)冬蟲夏草。在實(shí)驗(yàn)中冬蟲夏草二級接種是人工培養(yǎng)冬蟲夏草的關(guān)鍵。冬蟲夏草二級接種是指由一級種接到接種瓶內(nèi)。二級種更有利于冬蟲夏草子實(shí)體的長出。接種前需要配制培養(yǎng)基和滅菌。接種時(shí)動作要快且準(zhǔn)降低污染率。接種后，放在黑暗室溫下培養(yǎng)，觀察結(jié)果，分析原因，探索更好的方法，從而更利于冬蟲夏草子實(shí)體的長出。