摘要：隨著基因科學(xué)的發(fā)展，蛋白質(zhì)組在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。本文介紹了蛋白質(zhì)組在心血管疾病中的應(yīng)用。

關(guān)鍵字：蛋白質(zhì)組心血管應(yīng)用

心血管疾病是疾病蛋白質(zhì)組研究的重要領(lǐng)域，當(dāng)前，研究者已從基因水平向蛋白質(zhì)水平深化，這是醫(yī)學(xué)研究發(fā)展的必然趨勢(shì)。因蛋白質(zhì)組學(xué)的廣泛應(yīng)用和潛在價(jià)值，其被稱為跨越基因組與臨床應(yīng)用之間鴻溝的橋梁。1.概述

蛋白質(zhì)是心臟功能的重要體現(xiàn)，蛋白質(zhì)參與心肌細(xì)胞的各種功能和調(diào)節(jié)，無(wú)論心臟處于正常還是急、慢性疾病狀態(tài)。因此，其在心血管疾病中的作用也愈來(lái)愈受到人們的關(guān)注。在心血管疾病的發(fā)病機(jī)制中，蛋白質(zhì)組的變化表現(xiàn)在多方面，如蛋白質(zhì)在病變前后在數(shù)量上的增多、減少或不變，在密度上的增多、減少或不變，在氨基酸組成或順序上的變化等。尋找差異性蛋白質(zhì)成為近幾年來(lái)各國(guó)研究者關(guān)注的焦點(diǎn)，這有助于闡明發(fā)病機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)。其逐漸發(fā)展成為一門新興學(xué)科—差異蛋白質(zhì)組學(xué)。

蛋白質(zhì)組的變化主要是由于蛋白質(zhì)在疾病狀態(tài)中的降解、合成、重修飾等因素造成的。如在心力衰竭模型中的熱休克蛋白豐度增加，在心肌頓抑時(shí)肌鈣蛋白減少等。正常心肌細(xì)胞可以分離出1176-1288個(gè)蛋白點(diǎn)。有研究者采用2-DE技術(shù)和計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析方法，對(duì)用去甲腎上腺素處理的應(yīng)激心肌細(xì)胞與正常心肌細(xì)胞的蛋白質(zhì)組進(jìn)行分離和比較，發(fā)現(xiàn)有11種蛋白質(zhì)在去甲腎上腺素誘導(dǎo)后發(fā)生明顯的變化，包括質(zhì)和量的變化，其中有一種只是在應(yīng)激后才表達(dá)。

2.常用的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)

一、教學(xué)目的

初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。

二、教學(xué)建議

教材中本實(shí)驗(yàn)安排為驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，有條件的學(xué)?？梢愿臑樘剿餍詫?shí)驗(yàn)，安排在講課之前，或與講課同步進(jìn)行。

本實(shí)驗(yàn)難度并不大，但內(nèi)容較多，實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，因此，必須作周密安排，才能按時(shí)完成。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下幾點(diǎn)。

1.增設(shè)教師演示實(shí)驗(yàn)。上課之前，教師應(yīng)該準(zhǔn)備好做演示實(shí)驗(yàn)所需的實(shí)驗(yàn)材料、用具、儀器和試劑等。同時(shí)，逐項(xiàng)完成還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)3類有機(jī)物的鑒定實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)課上，將3個(gè)實(shí)驗(yàn)的正確結(jié)果分別展示在講臺(tái)上，并作扼要的介紹，以便使學(xué)生將自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與教師的演示實(shí)驗(yàn)作比較。

摘要：隨著科學(xué)的不斷發(fā)展，運(yùn)用質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)的分析日益增多，本文簡(jiǎn)要綜述了肽和蛋白質(zhì)等生物大分子質(zhì)譜分析的特點(diǎn)、方法及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析的原理、方式和應(yīng)用，并對(duì)其發(fā)展前景作出展望。

關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì)，質(zhì)譜分析，應(yīng)用

前言：

蛋白質(zhì)是生物體中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物細(xì)胞，約占細(xì)胞干質(zhì)量的50%以上，作為生命的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、調(diào)節(jié)代謝、抵御外來(lái)物質(zhì)入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關(guān)重要的作用，因此蛋白質(zhì)也是生命科學(xué)中極為重要的研究對(duì)象。關(guān)于蛋白質(zhì)的分析研究，一直是化學(xué)家及生物學(xué)家極為關(guān)注的問(wèn)題，其研究的內(nèi)容主要包括分子量測(cè)定，氨基酸鑒定，蛋白質(zhì)序列分析及立體化學(xué)分析等。隨著生命科學(xué)的發(fā)展，儀器分析手段的更新，尤其是質(zhì)譜分析技術(shù)的不斷成熟，使這一領(lǐng)域的研究發(fā)展迅速。

自約翰.芬恩(JohnB.Fenn)和田中耕一(Koichi.Tanaka)發(fā)明了對(duì)生物大分子進(jìn)行確認(rèn)和結(jié)構(gòu)分析的方法及發(fā)明了對(duì)生物大分子的質(zhì)譜分析法以來(lái)，隨著生命科學(xué)及生物技術(shù)的迅速發(fā)展，生物質(zhì)譜目前已成為有機(jī)質(zhì)譜中最活躍、最富生命力的前沿研究領(lǐng)域之一[1]。它的發(fā)展強(qiáng)有力地推動(dòng)了人類基因組計(jì)劃及其后基因組計(jì)劃的提前完成和有力實(shí)施。質(zhì)譜法已成為研究生物大分子特別是蛋白質(zhì)研究的主要支撐技術(shù)之一，在對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的研究中占據(jù)了重要地位[2]。

1．質(zhì)譜分析的特點(diǎn)

[摘要]蛋白質(zhì)與酶工程是高校生物技術(shù)專業(yè)的一門重要課程。近年來(lái)隨著生物技術(shù)的發(fā)展，國(guó)家和市場(chǎng)對(duì)生物技術(shù)專業(yè)人才的需求和要求也逐步提高，為了更好地適應(yīng)這些要求，本文以培養(yǎng)應(yīng)用型人才為導(dǎo)向，對(duì)本科生蛋白質(zhì)與酶工程課程教學(xué)進(jìn)行了改革與探索。通過(guò)整合優(yōu)化教學(xué)內(nèi)容，改進(jìn)課堂教學(xué)模式，挖掘課程思政元素，加強(qiáng)實(shí)踐能力培養(yǎng)和強(qiáng)化過(guò)程考核等方式，促進(jìn)蛋白質(zhì)與酶工程課程教學(xué)的發(fā)展和提高。

[關(guān)鍵詞]蛋白質(zhì)與酶工程；生物技術(shù)；教學(xué)改革；應(yīng)用型人才；課程思政

蛋白質(zhì)與酶工程是高校生物技術(shù)專業(yè)的一門重要課程，很多高校的生物技術(shù)專業(yè)作為一門專業(yè)核心課程講授[1]。近年來(lái)，隨著生命科學(xué)與技術(shù)的迅猛發(fā)展，生物技術(shù)在醫(yī)療、醫(yī)藥、健康及環(huán)保等產(chǎn)業(yè)中占據(jù)越來(lái)越重要的地位。而蛋白質(zhì)工程和酶工程作為生物技術(shù)的重要組成部分，在上述這些產(chǎn)業(yè)中占據(jù)極其重要的地位。尤其是在全球新冠疫情的大背景下，市場(chǎng)對(duì)檢測(cè)試劑、疫苗及抗病毒藥物的需求猛增，而這些檢測(cè)試劑、疫苗及藥物的研發(fā)及生產(chǎn)正是蛋白質(zhì)工程和酶工程的重要內(nèi)容之一。在這一形勢(shì)下，對(duì)相應(yīng)的蛋白質(zhì)及酶工程生物技術(shù)人才需求會(huì)增加，要求也會(huì)進(jìn)一步提高。高校作為我國(guó)科技人才培養(yǎng)的重要組成部分，培養(yǎng)出適應(yīng)新形勢(shì)下市場(chǎng)需求的人才是高校的重要任務(wù)之一[2-3]。因此，為了更好地適應(yīng)市場(chǎng)需求，培養(yǎng)出高質(zhì)量的應(yīng)用型人才，以培養(yǎng)具備實(shí)踐能力的應(yīng)用型人才為導(dǎo)向，對(duì)我校本科生蛋白質(zhì)與酶工程課程教學(xué)進(jìn)行了改革與探索。

1教學(xué)內(nèi)容的整合與優(yōu)化

蛋白質(zhì)與酶工程課程實(shí)際上可以分為蛋白質(zhì)與酶工程兩大模塊[1]。二者既有相通之處，又有各自的側(cè)重點(diǎn)。在很多院校，蛋白質(zhì)工程和酶工程是作為兩門獨(dú)立的課程分別設(shè)課。我校依據(jù)兩門課程的特點(diǎn)，將二者整合為一門課程。蛋白質(zhì)工程與酶工程都是涉及到大量專業(yè)基礎(chǔ)知識(shí)和其他學(xué)科知識(shí)綜合運(yùn)用的課程，包括有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)等。二者涉及到的知識(shí)繁多復(fù)雜，難度較大。將二者整合為一門課程進(jìn)一步增大了課程的難度。如何在有限的總課時(shí)量下將課程的核心知識(shí)傳授給學(xué)生是本課程面臨的第一個(gè)挑戰(zhàn)。為了更好地切合應(yīng)用型人才的培養(yǎng)目標(biāo)，結(jié)合地方性院校學(xué)生的實(shí)際，對(duì)課程的大綱進(jìn)行了調(diào)整，對(duì)教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)蛋白質(zhì)工程和酶工程兩個(gè)模塊的內(nèi)容進(jìn)行了深度的整合。增加了課程中與應(yīng)用和實(shí)踐結(jié)合更加緊密的內(nèi)容的學(xué)時(shí)比例，更加強(qiáng)調(diào)課程的應(yīng)用性。例如弱化了蛋白質(zhì)工程中蛋白質(zhì)理性設(shè)計(jì)中的理論及計(jì)算內(nèi)容，這些內(nèi)容涉及到大量艱深的物理及化學(xué)理論知識(shí)，對(duì)于本科生來(lái)說(shuō)難度過(guò)大。整合了蛋白質(zhì)工程中蛋白質(zhì)的修飾和酶工程中酶分子修飾改造的內(nèi)容。對(duì)整個(gè)課程中涉及到其他課程的知識(shí)進(jìn)行了梳理，將學(xué)生在其他課程中學(xué)過(guò)的知識(shí)進(jìn)行了精簡(jiǎn)，以突出課程的核心內(nèi)容。例如課程涉及到的蛋白質(zhì)與酶的基礎(chǔ)知識(shí)，學(xué)生基本上在生物化學(xué)及分子生物學(xué)等前置課程中學(xué)過(guò)，在教學(xué)的時(shí)候，以課前自學(xué)和課堂提問(wèn)的方式，讓學(xué)生回顧這些內(nèi)容。課程還涉及與基因工程、細(xì)胞工程和發(fā)酵工程等課程交叉的內(nèi)容，在制訂教學(xué)內(nèi)容時(shí)，將重復(fù)的內(nèi)容進(jìn)行了精簡(jiǎn)。通過(guò)這些措施，讓整個(gè)課程思路脈絡(luò)更加清晰，重點(diǎn)突出，教學(xué)內(nèi)容也更加貼近應(yīng)用性實(shí)踐性的要求。

2教學(xué)方法的改革與探索

摘要:進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，生物工程技術(shù)突飛猛進(jìn)，蛋白質(zhì)工程技術(shù)是生物工程技術(shù)的一個(gè)重要組成方面。目前，人們已經(jīng)可以利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在基因水平上對(duì)DNA進(jìn)行設(shè)計(jì)、重組，通過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯等過(guò)程合成自然界中不存在的蛋白質(zhì)。這一技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于生物藥物的研發(fā)當(dāng)中，本文將簡(jiǎn)要對(duì)生物藥物研發(fā)中的蛋白質(zhì)工程技術(shù)進(jìn)行額分析。

關(guān)鍵詞:生物藥物研發(fā);蛋白質(zhì)工程;技術(shù)應(yīng)用

生物工程技術(shù)自從上世紀(jì)70年代興起以來(lái)，已經(jīng)發(fā)展了將近50年的時(shí)間。到了21世紀(jì)，生物工程技術(shù)特別是其中的蛋白質(zhì)工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，正推動(dòng)這生命科學(xué)的不斷進(jìn)步。利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)，我們可以對(duì)分子進(jìn)行設(shè)計(jì)，對(duì)DNA進(jìn)行重組，以生產(chǎn)我們需要的但自然界中不存在的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)工程技術(shù)已經(jīng)成為生物藥物生產(chǎn)中不可或缺的一個(gè)重要的組成部分。

一、生物藥物

生物藥物是綜合了生物學(xué)、生物化學(xué)以及醫(yī)學(xué)的極高融合度的產(chǎn)物，生物藥物的生產(chǎn)主要是在生物體內(nèi)，利用生物體的組織細(xì)胞和體液等進(jìn)行。生物藥物的種類繁多，按照藥物的功能大致可分為治療藥物、預(yù)防藥物和診斷疫苗。由于生物藥物大多產(chǎn)自于生物體內(nèi)，因此生物藥物具有普通藥物不具備的優(yōu)越的藥理學(xué)性質(zhì)，生物藥物的藥理活性比普通藥物更高;治療腫瘤、艾滋病等的治療藥物其比普通藥物的針對(duì)性更高，毒副作用小，會(huì)減少藥物對(duì)于體內(nèi)正常細(xì)胞的損傷。除了應(yīng)用于醫(yī)療行業(yè)，生物藥物還被廣泛應(yīng)用于保健品行業(yè)和化妝品領(lǐng)域，具有較為廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。根據(jù)上述的分析，生物藥物具有十分廣泛的應(yīng)用，在國(guó)內(nèi)國(guó)外也擁有著廣闊的市場(chǎng)。但是由于我國(guó)的生物藥物行業(yè)起步較晚，生物藥物的制造生產(chǎn)相對(duì)歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家較為落后，但由于市場(chǎng)的刺激，我國(guó)的生物藥物行業(yè)發(fā)展十分迅速，生物藥物的制造技術(shù)和水平得到了大幅度的提高。

二、蛋白質(zhì)工程技術(shù)在生物藥物研發(fā)中的優(yōu)勢(shì)

蛋白質(zhì)是生物體中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物細(xì)胞，約占細(xì)胞干質(zhì)量的50%以上，作為生命的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、調(diào)節(jié)代謝、抵御外來(lái)物質(zhì)入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關(guān)重要的作用，因此蛋白質(zhì)也是生命科學(xué)中極為重要的研究對(duì)象。

1質(zhì)譜分析的特點(diǎn)

質(zhì)譜分析用于蛋白質(zhì)等生物活性分子的研究具有如下優(yōu)點(diǎn)：很高的靈敏度能為亞微克級(jí)試樣提供信息，能最有效地與色譜聯(lián)用，適用于復(fù)雜體系中痕量物質(zhì)的鑒定或結(jié)構(gòu)測(cè)定，同時(shí)具有準(zhǔn)確性、易操作性、快速性及很好的普適性。

2質(zhì)譜分析的方法

近年來(lái)涌現(xiàn)出較成功地用于生物大分子質(zhì)譜分析的軟電離技術(shù)主要有下列幾種：

①電噴霧電離質(zhì)譜；

【摘要】目的探討特殊配方飼料引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢的原因。方法將文獻(xiàn)提供的特殊飼料配方加以改進(jìn)，合理配比各種營(yíng)養(yǎng)成分，特別是提高了蛋白質(zhì)的含量。結(jié)果經(jīng)過(guò)改進(jìn)的特殊配方飼料飼喂大鼠后，其體重增長(zhǎng)恢復(fù)正常。結(jié)論在使用特殊配方飼料時(shí)，蛋白質(zhì)含量偏低往往是引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢的重要原因。

【關(guān)鍵詞】動(dòng)物實(shí)驗(yàn)物飼料蛋白質(zhì)體重增長(zhǎng)

EffectofPeculiarFormulaFeedontheBodyWeightofLaboratoryAnimals

QIANXiaofei，TANGJiaming

(DepartmentofLaboratoryAnimalScienceofShanghaiUniversityofTraditional

ChineseMedicine，Shanghai201203，China)

【關(guān)鍵詞】高溫；輻射；孕鼠胚胎；神經(jīng)發(fā)育；腦熱應(yīng)激蛋白質(zhì)【摘要】目的探討高溫聯(lián)合輻射致胚胎神經(jīng)發(fā)育與早期胚胎腦蛋白質(zhì)和HSPs表達(dá)的關(guān)系。方法將130只孕鼠按隨機(jī)抽簽分為13組，每組10只。在鼠妊娠第8d，第9d分別接受60Co及γ-射線全身照射各1次,照射劑量1.0Gy；第10d各置溫箱中,分別使其肛溫保持在37±0.5℃，41±0.5℃，42±0.5℃,并持續(xù)3，4，5min。移出溫箱2h后，每組每時(shí)段隨機(jī)取5只脫頸法處死，采用Westerndotblot和lowry方法定量分析胚胎腦HSP70和蛋白質(zhì)含量與胚胎神經(jīng)系統(tǒng)畸形。結(jié)果高溫聯(lián)合輻射對(duì)胚胎神經(jīng)毒性明顯增加，并與高溫強(qiáng)度及作用時(shí)間呈正相關(guān)；高溫聯(lián)合輻射作用于胚胎早期對(duì)胚胎腦蛋白質(zhì)降低有復(fù)合作用（P＜0.01），并可誘導(dǎo)腦HSP70合成。結(jié)論高溫與輻射聯(lián)合致神經(jīng)發(fā)育與胚胎腦蛋白質(zhì)合成及熱應(yīng)激蛋白的誘導(dǎo)有一定的相關(guān)性?！娟P(guān)鍵詞】高溫；輻射；孕鼠胚胎；神經(jīng)發(fā)育；腦熱應(yīng)激蛋白質(zhì)Effectsofhyperthermiacombinedwithradiationonembryonicnervousdevelopmentandheatshockproteinofbrain【Abstract】ObjectiveToexploretherelationbetweentheembryonicnervousdevelopmentinducedbyhyperthermiacombinedwithradiationandearlyembryonicbrainproteinsorHSPs''''expression.Methods130pregnantmicewererandomlydividedinto13groups(eachn=13).Onthe8thand9thdayofpregnance,themicereceivedonetimeofgeneralirradiationof60Coandγrayrespectively,thedosageofirradiationwas1.0Gy;onthe10thday,themicewereputinhotboxeskeepingtheirrectaltemperatureat37±0.5℃,41±0.5℃and42±℃0.5℃persistingfor3,4and5mins,respectively.Aftertwohoursofthemiceleaveingwarmingboxes,5micerandomlyselectedfromeachgrouppertimesectionwereexecutedbycervicalvertebraluxation.TheHSP70ofembryonicbrain,proteincontentanddeformationsofembryonicnervoussystemswerequantitativelyanalyzedwiththeWesterndotblotandLowrymethod.ResultsThetoxicityofhyperthermiacombinedwithirradiationtoembryosmarkedlyincreasedandwaspositivelyrelatedtohyperthermiaintensityandduration;hyperthermiawithirradiationhadcompoundactiononreducementofembryonicbrainproteinsinearlyembryo(P<0.01)andinducedthesynthesisofbrainHSP70.ConclusionTherewascertainrelativityofnervousdevelopmentinducedbyhyperthermiacombinedwithirradiationandsynthesisofembryonicbrainproteinsorinductionofHSP70.【Keywords】Hyperthermia;radiation;embryoofpregnantmice;nervousdevelopment;theHSPs胚胎、組織器官和細(xì)胞對(duì)各種異常生理環(huán)境做出應(yīng)答反應(yīng)的主要產(chǎn)物之一是熱休克蛋白基因編碼的熱應(yīng)激蛋白(heatshockprotein,HSPs)合成增多,HSPs和腦蛋白質(zhì)含量變化能準(zhǔn)確反映腦分化和腦損傷程度，文獻(xiàn)報(bào)道多為單一的高熱或電離輻射可能對(duì)胚胎和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育產(chǎn)生效應(yīng)。本研究試圖探討高溫與輻射聯(lián)合對(duì)胚胎神經(jīng)系統(tǒng)畸形的影響，為人類的優(yōu)生優(yōu)育提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象選取由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心繁育提供的健康未生育的SD雌性大鼠(體重190～210g)和雄性大鼠(225～275g)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。1.2妊娠確定動(dòng)情期雌雄鼠按2:1合籠過(guò)夜，次日晨檢查雌鼠，以發(fā)現(xiàn)陰栓為妊娠依據(jù)，并定為懷孕第0d。確定入組孕鼠130只。1.3分組與處理將130只孕鼠按隨機(jī)抽簽分成13組，每組10只。于妊娠第8，9d分別接受60Co及γ-射線全身照射各1次，劑量1.0Gy；第10d每組各置溫箱中,分別使其肛溫保持37±0.5℃，41±0.5℃，42±0.5℃,并持續(xù)3，4，5min。孕鼠移出溫箱2h后，每組隨機(jī)取5只，脫頸法處死，取出胎鼠，取全腦組織制備勻漿［1］，測(cè)量HSP70和蛋白質(zhì)；18d后每組隨機(jī)取5只，脫頸法處死，消毒后剖腹，解剖鏡下依次剝離蛻膜、Reicherts膜、卵黃膜和羊膜，然后將分離的胚胎置于光鏡下觀察胚胎神經(jīng)系統(tǒng)畸形狀況。1.4腦蛋白質(zhì)與HSP70檢測(cè)1.4.1腦蛋白質(zhì)檢測(cè)取勻漿上清液5μL按Lowry氏法［2］測(cè)定總蛋白含量。1.4.2HSP70檢測(cè)以Westerndotbot方法［3］，用已知HSP70300mg・L-1配成100mg・L-1、50mg・L-1、25mg・L-1、12.5mg・L-1、6.25mg・L-1參照系列，與樣品同步點(diǎn)樣于同一個(gè)定量型硝酸纖維素濾膜（浙江省黃巖市四清生化材料廠產(chǎn)）上，制成免疫印漬膜。用兔抗人HSP70單克隆抗體及辣根過(guò)氧化物酶二氨基聯(lián)苯胺法顯色，終止反應(yīng)后迅速照相和掃描（CS930掃描儀，460nm波長(zhǎng)），根據(jù)參照系列HSP70濃度的光密度計(jì)算每毫克腦組織蛋白HSP70含量(μg・mg.prot)。1.5統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間各時(shí)斷數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1高溫聯(lián)合輻射對(duì)孕鼠胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響，見(jiàn)表1。表1高溫、輻射對(duì)孕鼠胚胎神經(jīng)系統(tǒng)的影響（略）注：*與37℃溫度組比較P<0.01；**與單獨(dú)高溫組比較P<0.01表2高溫與輻射對(duì)鼠妊娠胚胎腦蛋白質(zhì)及HSP70的影響（略）注：*與單獨(dú)高溫組比較P<0.01表1顯示，在鼠妊娠第8，9d，高溫聯(lián)合輻射對(duì)胚胎神經(jīng)系統(tǒng)毒性明顯增加，并與高溫強(qiáng)度及作用時(shí)間呈正相關(guān)，神經(jīng)管未閉、體位異常、腦形態(tài)異常因子差異有極顯著性（P<0.01）。2.2高溫與輻射對(duì)鼠妊娠胚胎腦蛋白質(zhì)及HSP70含量的影響，見(jiàn)表2。表2顯示，鼠妊娠在高溫及高溫聯(lián)合輻射可導(dǎo)致胎腦蛋白質(zhì)含量下降,誘導(dǎo)HSP70大量合成；42℃組與37℃組比較誘導(dǎo)HSP70合成差異有極顯著性（P＜0.01)；高溫聯(lián)合輻射組胎腦蛋白質(zhì)含量下降有明顯變化,并與溫度呈正相關(guān),差異有極顯著性（P＜0.01)。3討論高溫在自然環(huán)境與勞動(dòng)環(huán)境中頻繁出現(xiàn)，某些疾病也常伴有發(fā)熱，而隨著放射性元素在醫(yī)學(xué)和工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用以及核能事業(yè)的發(fā)展，懷孕早期的婦女在工作、生活以及疾病等情況下經(jīng)常會(huì)暴露于高溫、輻射，或兩者復(fù)合作用之下，處于分化中的神經(jīng)器官對(duì)致畸因子最敏感。流行病學(xué)調(diào)查推測(cè)，高溫可能是引起人類神經(jīng)系統(tǒng)畸形的重要環(huán)境因素。發(fā)育中的大腦對(duì)輻射具有特殊的敏感性，正常的大腦發(fā)育中大量地存在程序化細(xì)胞死亡，其可被電離輻射加速或改變［4］。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［5，6］熱處理孕8.5～10.5d的大鼠畸胎發(fā)生率明顯高于熱處理＜8.5d或＞10.5d的大鼠的畸胎發(fā)生率。本研究顯示，在鼠妊娠第8，9d，高溫聯(lián)合輻射對(duì)胚胎神經(jīng)毒性明顯增加，并與高溫強(qiáng)度及作用時(shí)間呈正相關(guān)，神經(jīng)管未閉、體位異常、腦形態(tài)異常因子差異有極顯著性（P<0.01）。提示胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育對(duì)高溫與輻射聯(lián)合的敏感性提高。大腦是體內(nèi)最復(fù)雜，對(duì)環(huán)境最敏感的器官，其神經(jīng)元不能再生，腦蛋白質(zhì)含量的變化能及時(shí)反映細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞分化和功能情況，同時(shí)HSP70的合成與早期胚胎大腦的生長(zhǎng)發(fā)育和異常的發(fā)生存在著內(nèi)在聯(lián)系［7］，測(cè)量胎腦蛋白質(zhì)及HSP70的變化是了解環(huán)境因素對(duì)早期胚胎大腦損傷程度的有效手段。本研究表明，鼠妊娠在高溫及高溫聯(lián)合輻射可導(dǎo)致胎腦蛋白質(zhì)含量下降,誘導(dǎo)HSP70大量合成；42℃高溫組與37℃組比較HSP70的合成有明顯差異，說(shuō)明高溫對(duì)大腦有一定刺激，誘導(dǎo)合成HSP70對(duì)腦[1][2]細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)；42℃高溫(＞3min)聯(lián)合輻射與37℃組比較，二項(xiàng)指標(biāo)均有顯著差異，與單獨(dú)42℃比較蛋白質(zhì)含量明顯下降，誘導(dǎo)HSP70合成并無(wú)明顯增加，提示輻射聯(lián)合高溫42℃(＞3min)對(duì)胎腦蛋白質(zhì)降低有復(fù)合作用，胎腦HSP70的合成水平?jīng)]有明顯變化。輻射可以誘導(dǎo)胎腦HSP70表達(dá)，但其誘導(dǎo)作用不如高溫明顯，高溫聯(lián)合輻射并不能增加單獨(dú)高溫或單獨(dú)輻射作用下誘導(dǎo)HSP70合成水平。表明應(yīng)激達(dá)到一定強(qiáng)度后，增加刺激并不能提高胎腦HSP70的合成水平，與文獻(xiàn)報(bào)道［5，6］結(jié)果相一致。提示上述因素影響胎腦蛋白質(zhì)合成而引起腦細(xì)胞損傷嚴(yán)重，一方面誘導(dǎo)HSP70合成，同時(shí)又因結(jié)構(gòu)破壞使合成受抑制，HSP70對(duì)細(xì)胞保護(hù)程度不夠而導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不良，機(jī)體表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常。胎腦蛋白質(zhì)含量的下降和誘導(dǎo)HSP70的合成的變化規(guī)律與高溫變化，持續(xù)時(shí)間，輻射及二因素聯(lián)合所致神經(jīng)發(fā)育結(jié)果基本一致，在胚胎發(fā)育過(guò)程外界環(huán)境因素引起的胎腦抗損傷與損傷受相關(guān)基因協(xié)調(diào)，如果協(xié)調(diào)出軌，HSP70對(duì)胚胎細(xì)胞保護(hù)強(qiáng)度不夠，導(dǎo)致胚胎中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞發(fā)育異常，機(jī)體表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常。參考文獻(xiàn)［1］蘆春林，KimmeCAKmelGL,等.高溫致胚胎發(fā)育毒性機(jī)理的研究［J］.北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，25(6)：435［2］SunXQ,LIJS,WuXY.Theexpressofheatshockprotein70inratbrainafterGZexposure［J］.JGravitphysio，2002，9(1)：23［3］FisherBR,BrownNT,Heredia,DJ.etal.Occipotalencepaloceleandearlygestationalhyperthemia［J］.Teratology，1995，52：90［4］高衛(wèi)民，周湘艷.出生前氚水照射對(duì)仔代大鼠生長(zhǎng)發(fā)育及神經(jīng)行為的影響［J］.中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，1998，18（6）：381［5］NoveyL，ScharrfKD.Heatstressproteinsandtranscriptionfactorscell［J］.Mol.Lifesci，1997，53：80［6］ChenH,LiuZ,ZhouZ,JiangM,QianL,WuS.Theregulatoryeffectofmemantineonexpressionandsynthesisofheatshockprotein70geneinneonatalratmodelswithcerebralhypoxicischemia［J］.ChinMedJ.2003，116(1)：558［7］MirkesPE.Hypothermiaandtheinductionofneuraltubedefectsinmices［J］.Teratology，1994，4

蛋白質(zhì)是包括人類在內(nèi)各種生物體的重要組成成分。對(duì)于生物體而言，蛋白質(zhì)的生老病死至關(guān)重要。然而，科學(xué)家關(guān)于蛋白質(zhì)如何“誕生”的研究成果很多，迄今至少有5次諾貝爾獎(jiǎng)授予了從事這方面研究的科學(xué)家，但關(guān)于蛋白質(zhì)如何“死亡”的研究卻相對(duì)較少，今年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)表彰的就是這方面的

工作。

瑞典皇家科學(xué)院6日宣布，將2004年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予以色列科學(xué)家阿龍·切哈諾沃、阿夫拉姆·赫什科和美國(guó)科學(xué)家歐文·羅斯，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解。其實(shí)他們的成果就是發(fā)現(xiàn)了一種蛋白質(zhì)“死亡”的重要機(jī)理。

蛋白質(zhì)是由氨基酸組成的，氨基酸如同磚頭，而蛋白質(zhì)則如結(jié)構(gòu)復(fù)雜的建筑。正如同有各種各樣的建筑一樣，生物體內(nèi)也存在著各種各樣的蛋白質(zhì)。不同的蛋白質(zhì)有不同的結(jié)構(gòu)，也有不同的功能。通常看來(lái)蛋白質(zhì)的合成要比蛋白質(zhì)的降解復(fù)雜得多，畢竟拆樓容易蓋樓難。

蛋白質(zhì)的降解在生物體中普遍存在，比如人吃進(jìn)食物，食物中的蛋白質(zhì)在消化道中就被降解為氨基酸，隨后被人體吸收。在這一過(guò)程中，一些簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)降解酶如胰島素發(fā)揮了重要作用。科學(xué)家對(duì)這一過(guò)程研究得較為透徹，因而在很長(zhǎng)一段時(shí)間他們認(rèn)為蛋白質(zhì)降解沒(méi)有什么可以深入研究的。不過(guò)，20世紀(jì)50年代的一些研究表明，事情恐怕沒(méi)有這么簡(jiǎn)單。

最初的一些研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)的降解不需要能量，這如同一幢大樓自然倒塌一樣，并不需要炸藥來(lái)爆破。不過(guò)，20世紀(jì)50年代科學(xué)家卻發(fā)現(xiàn)，同樣的蛋白質(zhì)在細(xì)胞外降解不需要能量，而在細(xì)胞內(nèi)降解卻需要能量。這成為困惑科學(xué)家很長(zhǎng)時(shí)間的一個(gè)謎。70年代末80年代初，今年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主阿龍·切哈諾沃、阿夫拉姆·赫什科和歐文·羅斯進(jìn)行了一系列研究，終于揭開(kāi)了這一謎底。原來(lái)，生物體內(nèi)存在著兩類蛋白質(zhì)降解過(guò)程，一種是不需要能量的，比如發(fā)生在消化道中的降解，這一過(guò)程只需要蛋白質(zhì)降解酶參與；另一種則需要能量，它是一種高效率、指向性很強(qiáng)的降解過(guò)程。這如同拆樓一樣，如果大樓自然倒塌，并不需要能量，但如果要定時(shí)、定點(diǎn)、定向地拆除一幢大樓，則需要炸藥進(jìn)行爆破。

摘要：隨著科學(xué)的不斷發(fā)展，運(yùn)用質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)的分析日益增多，本文簡(jiǎn)要綜述了肽和蛋白質(zhì)等生物大分子質(zhì)譜分析的特點(diǎn)、方法及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析的原理、方式和應(yīng)用，并對(duì)其發(fā)展前景作出展望。

關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì)，質(zhì)譜分析，應(yīng)用

前言：

蛋白質(zhì)是生物體中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物細(xì)胞，約占細(xì)胞干質(zhì)量的50%以上，作為生命的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、調(diào)節(jié)代謝、抵御外來(lái)物質(zhì)入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關(guān)重要的作用，因此蛋白質(zhì)也是生命科學(xué)中極為重要的研究對(duì)象。關(guān)于蛋白質(zhì)的分析研究，一直是化學(xué)家及生物學(xué)家極為關(guān)注的問(wèn)題，其研究的內(nèi)容主要包括分子量測(cè)定，氨基酸鑒定，蛋白質(zhì)序列分析及立體化學(xué)分析等。隨著生命科學(xué)的發(fā)展，儀器分析手段的更新，尤其是質(zhì)譜分析技術(shù)的不斷成熟，使這一領(lǐng)域的研究發(fā)展迅速。

自約翰.芬恩(JohnB.Fenn)和田中耕一(Koichi.Tanaka)發(fā)明了對(duì)生物大分子進(jìn)行確認(rèn)和結(jié)構(gòu)分析的方法及發(fā)明了對(duì)生物大分子的質(zhì)譜分析法以來(lái)，隨著生命科學(xué)及生物技術(shù)的迅速發(fā)展，生物質(zhì)譜目前已成為有機(jī)質(zhì)譜中最活躍、最富生命力的前沿研究領(lǐng)域之一[1]。它的發(fā)展強(qiáng)有力地推動(dòng)了人類基因組計(jì)劃及其后基因組計(jì)劃的提前完成和有力實(shí)施。質(zhì)譜法已成為研究生物大分子特別是蛋白質(zhì)研究的主要支撐技術(shù)之一，在對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的研究中占據(jù)了重要地位[2]。

1．質(zhì)譜分析的特點(diǎn)